人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向角膜內(nèi)皮樣細(xì)胞分化的初步實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文題名（中英對(duì)照）：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向角膜內(nèi)皮樣細(xì)胞分化的初步實(shí)驗(yàn)研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向角膜內(nèi)皮樣細(xì)胞分化的初步實(shí)驗(yàn)研究DifferentiationofHumanUmbilicalCdderivedMesenchymalStemCellsintoCnealEndotheliumlikeCellsinVitro作者姓名：祁冰祁冰指導(dǎo)教師姓名及學(xué)位、職稱(chēng)：侯光輝侯光輝主任醫(yī)師主任醫(yī)師副教授副教授學(xué)科、專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：眼科學(xué)

2、眼科學(xué)論文提交日期：2014年4月論文答辯日期：答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人：學(xué)位授予單位和日期：暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文I人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向角膜內(nèi)皮樣細(xì)胞分化的初步實(shí)驗(yàn)研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向角膜內(nèi)皮樣細(xì)胞分化的初步實(shí)驗(yàn)研究中文摘要中文摘要組織工程角膜是近來(lái)興起的一項(xiàng)非常有前景的治療手段，其可克服供體角膜的缺乏和可能發(fā)生的免疫排斥反應(yīng)等由傳統(tǒng)角膜移植術(shù)所帶來(lái)的局限。組織工程角膜構(gòu)建最突出的問(wèn)題是種子細(xì)胞的來(lái)源。由于目前大量體外培養(yǎng)獲取人的

3、角膜內(nèi)皮細(xì)胞仍面臨著許多困難。因此，尚需進(jìn)一步尋找其他種類(lèi)的細(xì)胞作為內(nèi)皮細(xì)胞的替代細(xì)胞。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞因獲取方便、無(wú)創(chuàng)及避免了胚胎干細(xì)胞倫理學(xué)爭(zhēng)議等優(yōu)點(diǎn)，近年來(lái)被廣泛的應(yīng)用于臨床研究。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞可分化為多種間葉組織細(xì)胞，其同時(shí)在組織和細(xì)胞替代治療及再生醫(yī)學(xué)方面具有極大的應(yīng)用價(jià)值。眾所周知，人類(lèi)和嚙齒類(lèi)動(dòng)物角膜內(nèi)皮組織起源于神經(jīng)嵴的眼周間葉組織。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在體外可大量擴(kuò)增并具有多向分化的潛能。因此，其是體外替代角膜內(nèi)皮細(xì)胞

4、的理想種子細(xì)胞來(lái)源。本研究中，我們通過(guò)共培養(yǎng)體系成功將人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成具有類(lèi)似內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)、標(biāo)志物及功能特性的內(nèi)皮樣細(xì)胞。第一部分：第一部分：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)和鑒定人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離、培養(yǎng)和鑒定目的：目的：建立人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)和鑒定的方法。方法：方法：用膠原酶消化法分離人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，并置于37℃，5%CO2孵育箱中培養(yǎng)，待其貼壁傳代后于倒置顯微鏡下行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀(guān)察；流式細(xì)胞儀檢測(cè)

5、其表面抗原表型；堿性磷酸酶及茜素紅染色鑒定其成骨誘導(dǎo)后的鈣質(zhì)沉積，油紅O用于成脂誘導(dǎo)后脂滴染色觀(guān)察。結(jié)果：結(jié)果：我們利用膠原酶消化法成功分離培養(yǎng)出人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，細(xì)胞表達(dá)多種抗原表型，如CD29CD44CD90和CD105，但不表達(dá)造血細(xì)胞及與移植排斥相關(guān)的抗原表型，如CD14CD31CD34CD40CD45和HLADR。在條件培養(yǎng)中可誘導(dǎo)分化為骨和脂肪細(xì)胞。結(jié)論：結(jié)論：通過(guò)膠原酶消化法可成功分離培養(yǎng)出人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞；分離培養(yǎng)的