人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化的研究.pdf

1、目的:探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)向心肌細(xì)胞分化的可能性,為心肌細(xì)胞的移植探索新的細(xì)胞來源。
　　方法:從人臍帶華爾通氏膠分離、培養(yǎng)MSCs,用5-氮雜胞苷(5-azacytidine,5-aza)和二甲基亞砜(DMSO)誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分化。觀察誘導(dǎo)后分化細(xì)胞形態(tài)的變化,用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)分化的細(xì)胞是否表達(dá)心肌肌鈣蛋白I(troponin I)、心肌肌鈣蛋白 T(troponinT)和心肌結(jié)蛋白(desmin)

2、, RT-PCR方法測(cè)定分化的細(xì)胞是否有心肌特異轉(zhuǎn)錄因子(Nkx2.5)和心肌細(xì)胞結(jié)蛋白(desmin)的cDNA的表達(dá)。透射電鏡觀察分化的心肌樣細(xì)胞內(nèi)是否有肌絲的存在,掃描電鏡觀察分化的心肌樣細(xì)胞的形態(tài)變化,從不同的層面鑒定誘導(dǎo)分化的心肌樣細(xì)胞是否具有心肌細(xì)胞的特性和功能?
　　結(jié)果:從人臍帶華爾通膠分離、培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞,體外生長形態(tài)類似于成纖維細(xì)胞,可以維持在未分化狀態(tài)穩(wěn)定增殖,體外增殖超過10代,細(xì)胞凍存一個(gè)月后復(fù)蘇,生長特

3、點(diǎn)與凍存前基本一致。人臍帶MSCs經(jīng)5-aza和DMSO誘導(dǎo)后可向心肌樣細(xì)胞分化,分化的細(xì)胞表達(dá)心肌細(xì)胞的標(biāo)記troponin I、troponinT和desmin。RT-PCR檢測(cè)證實(shí),人臍帶MSCs誘導(dǎo)前不表達(dá)Nkx2.5和desmin,經(jīng)5-aza和DMSO誘導(dǎo)后,分化的細(xì)胞檢測(cè)到有心肌特異轉(zhuǎn)錄因子(Nkx2.5)和心肌細(xì)胞結(jié)蛋白(desmin)的cDNA的表達(dá)。透射電鏡可以觀察分化的細(xì)胞漿中有肌絲的存在。
　　結(jié)論:人臍帶