誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣組織分化的初步研究.pdf

1、目的:
　　采用心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液、心肌組織裂解液誘導(dǎo)MSCs向心肌樣細(xì)胞分化、形成心肌組織樣結(jié)構(gòu)。
　　方法:
　　優(yōu)化間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)體系，采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)MSCs，建立間充質(zhì)干細(xì)胞系;采用差速貼壁法純化培養(yǎng)心肌細(xì)胞，為實(shí)驗(yàn)提供參照。選取生長(zhǎng)良好的第3代MSCs分為三組:Ⅰ組空白對(duì)照組，用含10％FBS的H-DMEM培養(yǎng)MSCs;Ⅱ組實(shí)驗(yàn)對(duì)照組（5-aza誘導(dǎo)組），用不同濃度5-aza作用于MSCs24

2、小時(shí)后換用含有10％FBS的H-DMEM培養(yǎng);Ⅲ組心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液組，收集心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液制備條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)培養(yǎng)MSCs。Ⅳ組心肌組織裂解液組，用心肌組織裂解液配置條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)培養(yǎng)MSCs。各組同時(shí)培養(yǎng)4W，在倒置相差顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，HE染色、電子顯微鏡下觀察心肌樣細(xì)胞的結(jié)構(gòu)。行α-Actin，connexin43免疫細(xì)胞化學(xué)染色、Vimentin，Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組織化學(xué)染色，鑒定心肌樣組織內(nèi)各種細(xì)胞及其相關(guān)結(jié)

3、構(gòu)。
　　結(jié)果:
　　在連續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)4周內(nèi)，心肌細(xì)胞培養(yǎng)的上清液不足以誘導(dǎo)骨髓MSCs分化為心肌樣細(xì)胞;5-aza、心肌組織裂解液能夠誘導(dǎo)骨髓MSCs分化為心肌樣細(xì)胞，且具有自律性搏動(dòng)，搏動(dòng)頻率約90-110次/分;HE染色可見(jiàn)由波形蛋白免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性的成纖維樣細(xì)胞包裹的肌束樣結(jié)構(gòu);心肌組織裂解液誘導(dǎo)組可見(jiàn)大量中空性結(jié)構(gòu)，管壁波形蛋白免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性，Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組織化學(xué)染色陰性。
　　結(jié)論: