脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的]
　　 1.比較不同代數(shù)的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ASCs)表面抗原。
　　 2.在體外誘導(dǎo)ASCs分化為心肌樣細(xì)胞。
　　 3.探討Notch通路信號(hào)分子Notch1和Jagged1在ASCs分化為心肌樣細(xì)胞過(guò)程中的作用。
　　 [方法]
　　 采用酶消化、離心和直接貼壁相結(jié)合方法分離培養(yǎng)SD大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，觀察干細(xì)胞增殖、傳代和復(fù)蘇情況，流式細(xì)胞儀分析干細(xì)胞表面抗原CD29、CD44、

2、CD31、CD45的表達(dá)水平，誘導(dǎo)干細(xì)胞向成骨、成脂方向分化;根據(jù)酶消化法及差速貼壁法分離純化心肌細(xì)胞(CMs)，觀察心肌細(xì)胞活性和生長(zhǎng)特點(diǎn);干細(xì)胞和心肌細(xì)胞混合培養(yǎng)為實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組為干細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)。用免疫熒光檢測(cè)cTnI和connexin43蛋白的表達(dá)情況，鑒定干細(xì)胞是否分化為心肌樣細(xì)胞，免疫細(xì)胞化學(xué)、RT-PCR檢測(cè)干細(xì)胞在增殖與分化為心肌樣細(xì)胞過(guò)程中Notch信號(hào)系統(tǒng)分子Notch1和Jagged1表達(dá)量的變化。
　　 [

3、結(jié)果]
　　 1.ASCs呈長(zhǎng)梭形、漩渦狀生長(zhǎng)，增殖傳代能力強(qiáng)，復(fù)蘇的細(xì)胞與未凍存細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯差異。
　　 2.ASCs鑒定:第3代ASCs結(jié)果如下:CD29表達(dá)率為97.78％±2.21％，CD44表達(dá)率為43.90％±1.84％，CD31表達(dá)率為8.26％±1.47％，CD45表達(dá)率為4.23％±1.91％，第3～5代ASCs表面抗原無(wú)明顯差異(P＞0.05)，對(duì)照組陰性表達(dá);成脂誘導(dǎo)示陽(yáng)性細(xì)胞可見(jiàn)紅色圓形脂滴，成

4、骨誘導(dǎo)示陽(yáng)性細(xì)胞可見(jiàn)玫瑰紅色鈣結(jié)節(jié)，對(duì)照組未見(jiàn)上述改變。
　　 3.分化細(xì)胞鑒定:轉(zhuǎn)化為心肌樣細(xì)胞的ASCs胞漿和胞膜表達(dá)cTnI蛋白（呈紅色熒光，陽(yáng)性細(xì)胞）和connexin43蛋白（綠色熒光，陽(yáng)性細(xì)胞），對(duì)照組未見(jiàn)以上變化。
　　 4.Notch信號(hào)分子檢測(cè):陽(yáng)性細(xì)胞胞質(zhì)有棕黃色和棕褐色顆粒狀物質(zhì)，對(duì)照組表達(dá)較弱或未見(jiàn)表達(dá)。
　　 5.RT-PCR檢測(cè):與對(duì)照組比較，ASCs和CMs混合培養(yǎng)組Notch1和J