BMP-2誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：冠心病在發(fā)達(dá)國家的發(fā)病率和死亡率都居于第一位，通常認(rèn)為心肌細(xì)胞在出生后即不能再生，心肌細(xì)胞死亡后大量的心肌細(xì)胞由疤痕組織替代，導(dǎo)致局部的心肌收縮紊亂，心功能下降，最后導(dǎo)致充血性心衰。本試驗(yàn)針對心衰的基本病理生理，通過BMP-2誘導(dǎo)后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植入受損的心肌內(nèi)，改善心室重構(gòu)，促進(jìn)梗死區(qū)血管新生來增加干細(xì)胞修復(fù)受損心肌的治療效果，并進(jìn)一步探討干細(xì)胞治療缺血性心肌病的機(jī)理。 方法：從健康梅山豬骨髓中分離培養(yǎng)BMSCs，

2、取第四代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，用BMP-2誘導(dǎo)24小時，促進(jìn)其向心肌細(xì)胞定向分化，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測誘導(dǎo)后不同時間點(diǎn)的心肌特異性蛋白cTnT和CX-43及MHC的表達(dá)。 健康雄性梅山豬15只隨機(jī)分為3組，經(jīng)心導(dǎo)管用明膠海綿栓塞LAD第二對角支建立心梗模型，A組(對照組)：梗死四周后通過介入方法在心梗區(qū)移植5mlDMEM；B組(干細(xì)胞組)：梗死四周后在心梗區(qū)移植1×107個BMSCs；C組(誘導(dǎo)組)：梗死四周后在心梗區(qū)移植1×107個經(jīng)

3、BMP-2誘導(dǎo)分化后的BMSCs。 檢測心梗前后及移植后心功能的變化，VII因子免疫組化染色計數(shù)新生毛細(xì)血管數(shù)量，Westernblot檢測各組梗死區(qū)GATA-4蛋白表達(dá)，ECT檢測心肌缺血狀況，大體標(biāo)本TTC法檢查各組心梗面積的變化。 結(jié)果：利用Ficoll分離和貼壁培養(yǎng)的方法可以獲取穩(wěn)定分裂的梅山豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。用BMP-2誘導(dǎo)后，MCSs的形態(tài)和排列發(fā)生變化。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示，cTnT和CX-43從誘導(dǎo)后3

4、周開始表達(dá)，4周cTnT表達(dá)增強(qiáng)，呈現(xiàn)密集的橫紋樣結(jié)構(gòu)；CX-43在3周位于細(xì)胞膜下，4周呈顆粒狀密集分布于肌管的相鄰細(xì)胞連接處；三周后可見MHC陽性棕黃顆粒表達(dá)于胞漿及胞核中。移植前，血流動力學(xué)LVDP、±dp/dtmax下降明顯(與心梗前比較，P＜0.05)，移植后，隨著時間的延長，B、C組的心功能較移植前有明顯改善(P＜0.05)，而C組的改善更為明顯(與B組比較，P＜0.05)；與A、B兩組，C組的心梗面積縮小，新生毛細(xì)血管數(shù)量