多種方法誘導干細胞向心肌細胞分化的實驗研究.pdf

1、目的： 通過體外實驗，觀察化學誘導劑和模擬的生物微環(huán)境誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向心肌細胞分化。 方法： 取6～8w齡SD大鼠股骨骨髓，培養(yǎng)至第二代，經(jīng)流式細胞儀檢測骨髓間充質(zhì)干細胞純度97％以上，然后分成五組：A組，單純DMEM細胞培養(yǎng)組(對照組)；B組，5-氮雜胞苷誘導組；C組，心肌細胞裂解液組；D組，心肌細胞裂解液組+5-氮雜胞苷組；E組，細胞間接接觸組。根據(jù)各自實驗條件誘導至第2w和第4w時，收獲細胞。應(yīng)用免疫

2、組化法檢測誘導后骨髓間充質(zhì)干細胞表達心肌特異性肌鈣蛋白T(cTnT)、連接蛋白43(CX-43)，血管內(nèi)皮細胞表面抗原標志CD31及肌性標志α-橫紋肌肌動蛋白(α-SCA)的表達情況。應(yīng)用RT-PCR法檢測各組早期心肌細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA4、NKX2.5、β-MHC及成熟心肌細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子α-MHC基因的表達情況，并進行簡單量的比較。 結(jié)果： 免疫組化檢測：實驗組誘導2w后，cTnT、CX-43表達陰性或低表達

3、，誘導4w后呈陽性表達，實驗組較對照組有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，實驗組之間無顯著差異(P>0.05)；對照組及B組無CD31表達，C，D，E組表達呈弱陽性，組間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；α-SCA誘導前骨髓間充質(zhì)細胞中既有低度表達，誘導后濃度明顯增高，實驗組間無差異(P>0.05)。 RT-PCR表達情況：實驗組誘導2w后條帶不明顯；誘導4w后均表達GATA4，NKX2.5，β-MHC，無α-MHC表達，從條帶密度和亮度

4、分析，實驗組較對照組有顯著差異(P<0.05)，實驗組間無顯著差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1.5-氮雜胞苷可以誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向心肌細胞分化。 2.骨髓間充質(zhì)干細胞因其“環(huán)境依賴性分化”特性，具有分化為心肌細胞的潛能。心肌細胞裂解液和細胞間接接觸模擬的心肌微環(huán)境也可以誘導骨髓間充質(zhì)干細胞分化成心肌樣細胞，且誘導的效果與誘導的時間及誘導劑濃度相關(guān)，分化的細胞介于成熟的心肌細胞和心肌祖細胞之間的心肌細胞前體。