體外模擬心肌環(huán)境誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的研究.pdf

1、目的: 體外模擬心肌環(huán)境，誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向心肌細(xì)胞分化，觀察其誘導(dǎo)作用，同時(shí)與5-氮雜胞苷(5-azacytidine,5-aza)的誘導(dǎo)作用進(jìn)行比較。 方法: 自成年Wister大鼠的骨髓分離MSCs，新生Wister乳鼠分離心肌細(xì)胞并制備心肌細(xì)胞凍融液作為培養(yǎng)基體外模擬心肌環(huán)境，分四組培養(yǎng)MSCs。A組為對(duì)照組即用普通培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞；B組為5-a

2、za組；C組為心肌細(xì)胞凍融液與5-aza共同培養(yǎng)；D組為心肌細(xì)胞凍融液培養(yǎng)。觀察細(xì)胞形態(tài)變化，利用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)鑒定心肌特異性蛋白 T(Troponin T，cTnT)，連接蛋白43(Connexin43)，a-橫紋肌動(dòng)蛋白(a-Sarcomeric Actin)，CD31的表達(dá)情況。在光鏡下隨機(jī)選擇8個(gè)非重疊視野，圖像分析分別計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞所占比例。數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，測(cè)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(￣x±s)表示，作成組比較t

3、檢驗(yàn)。P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: ①體外模擬心肌微環(huán)境情況：培養(yǎng)7d時(shí)心肌細(xì)胞形成細(xì)胞簇或細(xì)胞單層，呈放射狀排列的同心圓狀或峰谷樣生長(zhǎng)，細(xì)胞簇搏動(dòng)呈明顯同步性。傳代后的心肌細(xì)胞仍具有自主收縮的特性。 ②骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外誘導(dǎo)結(jié)果：誘導(dǎo)處理1周后，5-氮雜胞苷組多數(shù)細(xì)胞呈桿狀，緊密平行排列生長(zhǎng)，細(xì)胞體積變大，可見(jiàn)肌絲樣結(jié)構(gòu)形成；心肌細(xì)胞凍融液組細(xì)胞有聚集生長(zhǎng)趨勢(shì)，形成大量的子細(xì)胞，可見(jiàn)大量的肌絲樣的結(jié)構(gòu)

4、；5-氮雜胞苷+心肌細(xì)胞凍融液組脫落或降解的細(xì)胞數(shù)明顯少于5-氮雜胞苷組，也形成肌絲樣結(jié)構(gòu)，但部分細(xì)胞內(nèi)有脂肪空泡形成。 ③免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定結(jié)果：誘導(dǎo)培養(yǎng)1周后，血清對(duì)照組僅表達(dá)α-橫紋肌肌動(dòng)蛋白；5-氮雜胞苷組表達(dá)心肌特異性蛋白T、α-橫紋肌肌動(dòng)蛋白、連接蛋白43，其陽(yáng)性率分別為20％，28％，25％，抗CD31染色呈陰性；心肌細(xì)胞凍融液組上述蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別為23％，32％，28％，明顯高于5-氮雜胞苷組與5-氮雜胞苷+心

5、肌細(xì)胞凍融液組(P<0.05)，同時(shí)抗CD31染色呈陽(yáng)性；5-氮雜胞苷+心肌細(xì)胞凍融液組上述蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別為21％，28％，24％，與5-氮雜胞苷組相比無(wú)明顯差異(P>0.05)，同時(shí)抗CD31染色呈陽(yáng)性 結(jié)論: ①以心肌細(xì)胞凍融液體外模擬心肌微環(huán)境，可高效誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞。 ②部分骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)CD31，即可向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化，提示與5-氮雜胞苷單一的肌細(xì)胞誘導(dǎo)作用相比，心肌細(xì)胞凍融