骨髓間充質(zhì)干細胞向心肌細胞的誘導(dǎo)分化及心肌梗死治療的實驗研究.pdf

1、目的：骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymalstemcells，MSCs)是造血基質(zhì)細胞的祖先細胞，在特定條件下可向成骨細胞、成軟骨細胞、肌腱、脂肪細胞、血管內(nèi)皮細胞及神經(jīng)細胞樣細胞分化，且易于獲得及擴增，是細胞替代治療和組織工程研究中常用的種子細胞。本研究從大鼠骨髓中分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞，初步探討其向心肌細胞定向分化機制以及移植治療心肌梗死的可行性，為進一步臨床研究和運用奠定基礎(chǔ)。 方法：(1)分離大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(

2、bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)，通過常規(guī)培養(yǎng)，在體外觀察其生長特性、抗原表達等特征；(2)分離培養(yǎng)新生大鼠的心肌細胞，觀察其在體外培養(yǎng)的生長特性、特異性抗原表達等特征：(3)體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞向心肌細胞定向分化并采用免疫熒光、RT—PCR等方法對誘導(dǎo)后細胞進行鑒定：(4)建立大鼠心肌梗死模型并以心電圖、心臟超聲和血心肌酶譜鑒定；(5)運用誘導(dǎo)前后的骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療大鼠心肌梗死模型

3、，并以心功能相關(guān)指標評價療效。 結(jié)果：(1)由骨髓分離培養(yǎng)得到的間充質(zhì)干細胞呈梭形貼壁生長，生長迅速，可大量繁殖。運用免疫熒光和流式細胞儀檢測顯示該群細胞高表達CD54(ICAM．1)、CD90(thy．1)分子，其中一小部分細胞亞群表達CD45分子。(2)由新生大鼠心肌組織分離培養(yǎng)得到心肌細胞呈簇樣生長并重疊成致密有邊界的細胞團，并出現(xiàn)節(jié)律性收縮，經(jīng)免疫熒光檢測表達心肌細胞特異的MHC(myosinheavychain)、de

4、smin和connexin分子。(3)經(jīng)5umol／L和lOumol／L5-aza誘導(dǎo)后的間充質(zhì)干細胞表面均可檢測到MHC、connexin和desmin分子，其中10umol／L5-aza誘導(dǎo)后的心肌樣細胞表達較強；經(jīng)20girl和1.00g/L復(fù)方香丹注射液誘導(dǎo)的心肌樣細胞均可表達MHC、connexin和desmin分子，尤以20g／L濃度組表達較強，陽性率可達95％左右，且細胞生長狀態(tài)良好，當香丹濃度達到250g幾以上時，細胞形

5、態(tài)開始不規(guī)則，邊界不清。(4)心肌梗死模型建立后心電圖ST段抬高，超聲心動圖可見明顯的心梗區(qū)域，心梗后24小時血心肌酶譜測定顯示CKMB、LDH也顯著升高。(5)統(tǒng)計學處理顯示，伴隨復(fù)方香丹注射液的MSCs注射至心肌梗死部位周邊組織后，心梗大鼠心功能較對照組有所改善。結(jié)論：骨髓間充質(zhì)干細胞具有向心肌細胞分化的潛質(zhì)，且取材方便，自體應(yīng)用時無免疫排斥性，是一種良好的心肌修復(fù)種子細胞。運用結(jié)扎冠狀動脈法可建立大鼠心肌梗死模型，且各項指標接近于