骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠急性心肌梗死后心肌細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　 急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是心血管疾病的中的一個(gè)重要的致死性疾病，目前臨床上的治療方法主要有藥物溶栓、植入支架、冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)、心臟移植術(shù)等。但這些治療方法僅能防止心梗范圍的擴(kuò)大，而不能使已壞死的心肌細(xì)胞逆轉(zhuǎn)，因此尋求更加有效的治療辦法，是國(guó)內(nèi)外學(xué)者共同的期望和任務(wù)。近十幾年來(lái)，隨著對(duì)具有多向分化潛能的干細(xì)胞的不斷研究，使之在細(xì)胞移植方面具有良好前景。骨髓間充

2、質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymalstem cells，BMSCs)具有取材方便、容易分離、低免疫源性等優(yōu)點(diǎn)。已有實(shí)驗(yàn)證明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，可以作為心肌梗死疾病的細(xì)胞移植，可以促進(jìn)損傷區(qū)血管的再生，并能減少心肌細(xì)胞的凋亡，而具體凋亡機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。
　　 本研究旨在觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠急性心肌梗死后心肌細(xì)胞凋亡因子Bcl-2（B cell Leukemia，B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2）蛋白和PDCD5（pro

3、grammed cell death5，程序化死亡分子5）蛋白及基因(PDCD5mRNA)表達(dá)的影響。
　　 方法:
　　 1、分組：健康SD雄性大鼠45只，隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、AMI組和BMSCs組，每組15只。對(duì)AMI組和BMSCs組采用結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支的方法建立心肌梗死模型，而對(duì)照組只打開(kāi)胸腔，不結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支。
　　 2、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)：以乳鼠股骨骨髓為干細(xì)胞來(lái)源，采用貼壁法體外培養(yǎng)骨

4、髓間充質(zhì)干細(xì)胞，5-溴脫氧尿核苷(BrdU)標(biāo)記備用。
　　 3、移植方法：冠脈結(jié)扎后30min，將BrdU標(biāo)記的BMSCs100uL在BMSCs組缺血周邊區(qū)域心外膜下4個(gè)不同部位注射，AMI組和對(duì)照組注射相同劑量的生理鹽水。
　　 4、檢測(cè)指標(biāo)：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植4周時(shí)處死大鼠，采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)BrdU陽(yáng)性干細(xì)胞及心肌Bcl-2、PDCD5蛋白表

5、達(dá)情況，采用PCR技術(shù)檢測(cè)PDCD5mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植4周時(shí)，BMSCs組在發(fā)生凝固性壞死的心肌內(nèi)可以看到局灶BrdU標(biāo)記陽(yáng)性的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。對(duì)于非梗死區(qū)心肌組織中PDCD5蛋白和mRNA表達(dá)及心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)，BMSCs組低于AMI組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。對(duì)于非梗死區(qū)心肌組織中Bcl-2蛋白，AMI組低于BMSCs組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。