犬急性心肌梗死后自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對血管密度和心肌凋亡影響的實驗研究.pdf

1、目的：將體外分離培養(yǎng)的犬自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，誘導(dǎo)標(biāo)記后移植至急性心肌梗死區(qū)，觀察其對血管密度和心肌細(xì)胞凋亡的影響。 方法：①動物：健康雜種犬36只，隨機分成細(xì)胞移植組、對照組，18只/組，實驗過程中對動物的處置符合動物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。②干細(xì)胞培養(yǎng)、誘導(dǎo)、標(biāo)記：無菌抽取實驗犬骨髓液10 mL，經(jīng)Percoll液密度梯度離心后貼壁法體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原的表達(dá)：傳代后行5-氮胞苷誘導(dǎo)(5-Aza)，5-溴

2、脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)標(biāo)記備用。③干細(xì)胞移植：兩組犬均建立急性心肌梗死模型，移植組在梗死區(qū)邊緣4個不同部位分別局部注射植入誘導(dǎo)標(biāo)記后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞懸液2mL，對照組在相應(yīng)部位注射等量的DMEM培養(yǎng)基。④指標(biāo)檢測：分別于細(xì)胞移植后1，2，4周取心臟標(biāo)本，采用原位末端標(biāo)記法檢測心肌細(xì)胞凋亡情況和免疫組織化學(xué)染色法檢測血管密度。 結(jié)果：①原代和傳代細(xì)胞體外培養(yǎng)：細(xì)胞體外培養(yǎng)24小時后貼壁明顯，細(xì)胞呈圓形梭形和不規(guī)則形等多種形態(tài)

3、；換液傳代后，細(xì)胞形態(tài)趨于一致，呈梭形。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)分裂增殖能力強，細(xì)胞呈集落式生長，集落外觀呈‘漩渦'狀，細(xì)胞生長曲線為“S”形②細(xì)胞表面標(biāo)志鑒定：傳代后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞CD34和CD31陽性率小于5％，而CD44和CD105陽性率高達(dá)90％以上。③心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)測定：移植部位的標(biāo)本切片經(jīng)抗BrdlJ免疫熒光染色后呈陽性，說明移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞已在心肌梗死部位定植。經(jīng)TUNEL染色后凋亡細(xì)胞核呈棕黃色，與對照組相比

4、，移植組細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著降低(P<0.01)。④心肌梗死區(qū)血管密度情況：干細(xì)胞移植后2周，移植組梗死區(qū)血管密度明顯高于對照組(P<0.05)；隨移植后時間延長，兩組間血管密度差異顯著性增加(4周時，P<0.01)，同時，移植組梗死區(qū)血管密度也隨移植時間延長逐漸增加(經(jīng)重復(fù)測量方差分析F=439.588，P<0.01)。 結(jié)論：①骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)簡單、增殖能力強、生長快，是細(xì)胞移植和心臟組織工程的理想種子細(xì)胞②犬自體骨