骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液對心肌梗死后細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：經(jīng)心導(dǎo)管用明膠海綿栓子栓塞豬的冠狀動脈左前降支(LAD)，建立心肌梗死的模型。在心梗后75分鐘、4周心導(dǎo)管介入術(shù)經(jīng)冠狀動脈注射等量的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)、干細(xì)胞條件培養(yǎng)液(MSC-CM)。研究骨銹間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液、干細(xì)胞對心肌細(xì)胞凋亡的影響，對可能其機(jī)制進(jìn)行初步探討；并對條件培養(yǎng)液中能減輕心肌細(xì)胞凋亡的細(xì)胞因子成分進(jìn)行初步分析。 方法：梅山豬30頭，隨機(jī)分為6組：75分鐘組：A組：對照組，心梗后75分鐘注射培

2、養(yǎng)基(DMEM)；B組：MSCs75分鐘組，心梗后75分鐘移植MSCs；C組：MSC-CM75分鐘組，心梗后75分鐘移植MSC-CM；4周組：D組：對照組，心梗后4周注射DMEM；E組：MSCs4周組，心梗后4周移植MSCs；F組：MSC-CM4周組，心梗后4周移植MSC-CM。應(yīng)用明膠海綿栓塞LAD，建立心梗模型。采用密度梯度離心與貼壁篩選相結(jié)合的方法分離純化、體外擴(kuò)增MSCs。干細(xì)胞(1×107/5mL)、條件培養(yǎng)液(5ml)經(jīng)心導(dǎo)

3、管注射到LAD栓塞處遠(yuǎn)端。75分鐘組分別于心梗前、移植后、移植后4小時，4周組分別于心梗前、移植后、移植后2周、4周，行Powerlab檢查，評估心功能；組織學(xué)觀察各組移植細(xì)胞的情況，測算心梗面積，免疫組織化學(xué)法檢測75分鐘組氧化應(yīng)激產(chǎn)物8-羥基2’脫氧鳥苷(8-OHdG)的表達(dá)，4周組心肌標(biāo)本行Ⅷ因子免疫組化檢測新生血管密度。Westemblot檢測75分鐘組細(xì)胞凋亡產(chǎn)物activecaspase3及phospho-SMAD2蛋白表達(dá)

4、，4周組調(diào)亡產(chǎn)物activecaspase3蛋白表達(dá)。采用ELISA方法檢測MSC-CM的細(xì)胞因子。 結(jié)果：心梗75分鐘組：(1)移植后，MSC-CM75分鐘組與對照組、MSCs75分鐘組相比，LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax等指標(biāo)明顯降低(P<0.05)；(2)MSC-CM75分鐘組8-OHdG與對照組、MSCs75分鐘組相比明顯減少(P<0.05)；(3)MSC-CM75分鐘組activecaspase3、p

5、hospho-SMAD2蛋白表達(dá)與對照組、MSCs75分鐘組相比明顯減少(P<0.05)；(4)MSC-CM75分鐘組心梗面積減少。心梗4周組：(1)移植后，MSCs4周組與對照組、MSC-CM4周組相比，LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax等指標(biāo)明顯降低(P<0.05)；(2)MSCs4周組activecaspase3蛋白表達(dá)與對照組、MSC-CM4周組相比明顯減少(P<0.05)；(3)Ⅷ因子免疫組化示：梗死交界區(qū)新生血

6、管的密度，MSC4周組與對照組、MSC-CM4周組相比明顯升高(P<0.05)；(4)MSCs4周組心梗面積減少。MSC-CM中可檢測到VEGF、HGF等細(xì)胞因子。 結(jié)論： 1、急性心肌梗死后，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液能減少梗死區(qū)心肌細(xì)胞caspase3和phospho-SMAD2蛋白表達(dá)，減少梗死心肌面積，改善心臟功能。其機(jī)制可能是通過減少梗死區(qū)心肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激和TGF-β的分泌兩條途徑，從而減輕梗死區(qū)心肌細(xì)胞凋亡

7、； 2、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可能通過增加新生血管的數(shù)量，改善梗死區(qū)的供血、供氧，抑制caspase3蛋白分子在心肌細(xì)胞的表達(dá)，從而減輕心肌細(xì)胞的凋亡，改善心功能； 3、心肌梗死急性期移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液能明顯的減輕心肌細(xì)胞凋亡，其效果要優(yōu)于干細(xì)胞移植；慢性心肌梗死期，干細(xì)胞可能通過增加梗死區(qū)新生血管密度等機(jī)制改善細(xì)胞凋亡，效果較移植培養(yǎng)液顯著； 4、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液對心肌凋亡的影響，可能是多種細(xì)胞