同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞心臟移植治療心肌梗死的研究.pdf

1、目的:心血管疾病是全球發(fā)病率、死亡率居先的疾病，慢性充血性心力衰竭是心血管疾病最終的共同轉(zhuǎn)歸。各種原因所致的心肌細(xì)胞丟失、瘢痕形成及心室重構(gòu)是造成心臟功能惡化的主要原因，也是最終導(dǎo)致慢性充血性心力衰竭的病理基礎(chǔ)。因此，近十年來興起的細(xì)胞移植治療損傷心肌的技術(shù)即細(xì)胞心肌成形術(shù)(celluarcardiomyoplasty，CCM)引起了人們高度的重視，已成為本專業(yè)的研究熱點(diǎn)。本文擬將大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bonemarrow-drived

2、mesenchymalstemcells，MSCs)進(jìn)行分離、純化、擴(kuò)增并誘導(dǎo)成心肌樣細(xì)胞，移植到同種異體大鼠的心肌梗死區(qū)，研究移植的MSCs對梗死部位和左室整體功能的影響。探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞心臟移植對心肌梗死治療的可行性和有效性。 方法:1、MSCs的分離、純化、擴(kuò)增和培養(yǎng)：取10只體重200±20g雌性Wistar大鼠，無菌條件下采集雙側(cè)股骨、脛骨骨髓，用培養(yǎng)液沖至培養(yǎng)瓶中，通過及時(shí)、反復(fù)傳代對細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增純化。作為供體細(xì)

3、胞來源。 2、MSCs向心肌樣細(xì)胞的誘導(dǎo)及鑒定：第3代細(xì)胞加入誘導(dǎo)劑5-氮胞苷(5-azacytidine，5-aza)5umol/L，24h換液去除誘導(dǎo)劑，每日在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞分化過程中的形態(tài)變化。應(yīng)用免疫組化法鑒定細(xì)胞肌動(dòng)蛋白及肌鈣蛋白的表達(dá)，對分化形成的心肌樣細(xì)胞進(jìn)行鑒定。 3、大鼠心梗模型的建立及細(xì)胞移植：將30只體重200±20g的雌性Wistar大鼠用水合氯醛腹腔麻醉、氣管插管連接微型呼吸機(jī)進(jìn)行通氣。液

4、氮冷凍大鼠左心室游離壁，制造心肌梗死模型。將30只大鼠隨機(jī)分為移植組和對照組，每組15只。心梗后立即進(jìn)行細(xì)胞移植。移植之前將心肌樣細(xì)胞用胰酶消化，開胸直視下于心肌梗死區(qū)及周圍用微量注射器植入細(xì)胞(5×106個(gè)/100ul)。 4、指標(biāo)檢測：手術(shù)前、細(xì)胞移植后1周、1個(gè)月分別應(yīng)用二維超聲心動(dòng)圖(twodimensionalechocardiography)和組織多普勒超聲心動(dòng)圖測定兩組大鼠心臟功能，所測數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后用均數(shù)±標(biāo)

5、準(zhǔn)差(x±s)表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。以P＜0.05為有顯著性差異。 結(jié)果： 1、MSCs的分離、純化、擴(kuò)增、培養(yǎng)及向心肌細(xì)胞的誘導(dǎo)：MSCs經(jīng)分離、純化、擴(kuò)增、培養(yǎng)后形態(tài)呈基本一致的梭形，加入誘導(dǎo)劑5-氮胞苷后經(jīng)免疫組化鑒定證實(shí)有肌動(dòng)蛋白(actin)、心肌特異性肌鈣蛋白Ⅰ(cardiac-specifictroponinⅠ)的表達(dá)。 2、心梗模型的建立和鑒定：冷凍大鼠心臟左心室前壁4天后心臟大體標(biāo)本，

6、可見瘢痕形成；病理切片顯示心肌纖維排列紊亂，核溶解，甚至心肌細(xì)胞消失，形成膠原纖維。 3、細(xì)胞移植對大鼠心臟功能的影響：移植后一月，移植組(15只)、對照組(15只)分別死亡6只和5只，最終實(shí)驗(yàn)動(dòng)物移植組(9只)、對照組(10只)完成整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程。數(shù)據(jù)分析表明：移植組細(xì)胞移植后一月，大鼠心臟功能與心梗一周時(shí)相比未有明顯惡化，與對照組相比有顯著性差異。 結(jié)論： 1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)分離、純化、擴(kuò)增培養(yǎng)及5-氮胞苷