骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合新生鼠心肌細(xì)胞移植治療心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: (1).觀(guān)察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)在心肌梗死心臟組織中的遷移、分化。 (2).觀(guān)察BMSCs移植、新生鼠心肌細(xì)胞(Neonatal rat’s cardiomyocytes，NRCs)移植和BMSCs聯(lián)合NRCs移植對(duì)大鼠心肌梗死的治療效果。 方法: (1).BMSCs的分離、純化、擴(kuò)增、標(biāo)記：取150±5g的雄性SD大

2、鼠(SD，Sprague Dawley)的長(zhǎng)骨骨髓作供體，經(jīng)密度梯度離心和貼壁篩選，培養(yǎng)、純化、擴(kuò)增BMSCs；收集第四代BMSCs，用CM—Dil熒光標(biāo)記。 (2).NRCs的分離、純化：取出生1天的SD乳鼠，用胰酶消化和差速貼壁方法分離、純化NRCs。 (3).移植細(xì)胞懸液的制備：移植細(xì)胞數(shù)為2×106用PBS配成細(xì)胞懸液。 (4).實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：體重為(300±20g)SD大鼠44只隨機(jī)分為四組。

3、 ①對(duì)照組(C組，n=10)：大鼠心肌梗死邊緣兩點(diǎn)、梗死區(qū)注射等量PBS(0.15 ml)； ②BMSCs移植組(M組，n=12)：大鼠心肌梗死邊緣兩點(diǎn)、梗死區(qū)注射BMSCs(2×106/0.15 ml)。 ③NRCs移植組(N組，n=10)：大鼠心肌梗死邊緣兩點(diǎn)、梗死區(qū)注射N(xiāo)RCs(2×106/0.15ml)。 ④BMSCs+NRCs組(MN組，n=12)：大鼠心肌梗死邊緣兩點(diǎn)、梗死區(qū)注射BMSCs+N

4、RCs(2×106/0.15 ml，按1:1比例混合)。 (5).細(xì)胞移植：采用結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支的方法，建立大鼠心肌梗死模型。將移植細(xì)胞，在心梗區(qū)及心梗邊緣直接注射移植。 (6).術(shù)后喂養(yǎng)4周，行心臟彩超及左室血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)心功能，再取心臟組織，熒光顯微鏡觀(guān)察BMSCs的遷移分布、分化及梗死區(qū)毛細(xì)血管密度。 結(jié)果: ①采用密度梯度離心和貼壁篩選法分離、培養(yǎng)的BMSCs形態(tài)均一，增殖旺盛。分離、培養(yǎng)的N

5、RCs生長(zhǎng)良好，呈節(jié)律性跳動(dòng)。 ②結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支，建立急性心肌梗死模型，心電圖上有Q波形成、ST段抬高等心肌損傷表現(xiàn)，HE染色可見(jiàn)心肌梗死區(qū)病理表現(xiàn)為細(xì)胞壞死、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維組織增生。 ③經(jīng)細(xì)胞移植治療的大鼠，心臟彩超、左室血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)心功能改善的結(jié)果：MN組、M組改善高于C組，MN組改善高于M組，射血分?jǐn)?shù)EF值(％)(MN組47.81±3.61 vs M組44.41±2.45 vs C組40.52±2.61

6、，P＜0.05;N組43.64±3.81與其它組比較，P＞0.05)，左室壓最大上升率+dp/dt(mmHg/s)(MN組3444.23±327.45 vs M組3167.26±266.98 vs C組2879.78±239.00，P＜0.05：N組2976.85±108.85與其它組比較，P＞0.05)，最大下降率-dp/dt(mmHg/s)(MN組3156.60±297.73 vs M組2892.38±226.18 vs C組206

7、0.60±281.40，P＜0.05;N組2770.35±110.23與其它組比較，P＞0.05)。 ④熒光顯微鏡下評(píng)價(jià)梗死區(qū)毛細(xì)血管密度:MN組、M組高于C組，MN組高于M組，毛細(xì)血管密度(個(gè)/HPF)(MN組5.73±1.47 vs M組3.93±0.91 vs C組2.04±0.87，P＜0.05：N組3.10±1.11與其它組比較，P＞0.05)。 ⑤免疫熒光染色觀(guān)察BMSCs的分布分化：M組及MN組有CM—Di