Y染色體標記同種異體大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞心肌移植研究.pdf

1、本研究的目的是鑒定Y染色體標記移植的同種異體骨髓間充質(zhì)干細胞(BM-MSCs)能否在急性心肌梗死大鼠心臟局部存活，檢測外源性肝細胞生長因子(HGF)能否促進移植細胞在梗死心肌的存活，探討MSCs、HGF以及兩者聯(lián)合治療對心功能的影響，明確同種異體BM-MSCs移植治療以及MSCs聯(lián)合HGF治療心肌梗死的可行性及效果。 方法：(1)Y染色體標記移植的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞在梗死心肌存活的鑒定。取雄性動物骨髓，Percoll離心獲取單

2、個核細胞，體外培養(yǎng)、擴增?？寺⌒坌源笫髎ry基因片段，并采用DIG進行探針標記。將10只雌性Wistar大鼠隨機分為MSCs組和MSCs+HGF組，采用結(jié)扎左前降支的方法復(fù)制急性心肌梗死模型，采用經(jīng)心外膜心肌直接注射的方法，在心肌梗死區(qū)及其周圍進行細胞移植。8周后行sry原位雜交檢測，采用圖像分析方法對陽性細胞進行定量分析。(2)同種異體骨髓間充質(zhì)干細胞移植聯(lián)合外源性肝細胞生長因子治療大鼠急性心肌梗死。將51只雌性Wistar大鼠隨機分

3、為DMEM對照組、MSCs治療組、HGF治療組和MSCs+HGF組，復(fù)制急性心肌梗死模型后給予相應(yīng)的治療。8周后采用導(dǎo)管法測量血流動力學(xué)及心功能，行形態(tài)學(xué)測量并計算梗死面積、左室球形指數(shù)和擴張指數(shù)，天狼猩紅染色偏振光顯微鏡下測量梗死區(qū)及非梗死區(qū)Ⅰ、Ⅲ型膠原容積分數(shù)，VⅢ因子免疫組化染色檢測毛細血管密度。 結(jié)果：(1)大鼠BM-MSCs生長迅速，細胞倍增時間約45.5h，多次傳代后形態(tài)上無明顯改變。擴增的sry片段特異性高。原位雜

4、交示兩個實驗組動物的心肌梗死注射部位均可檢測到sry陽性細胞，但兩個實驗組的陽性細胞積分光密度(IOD)沒有顯著差異。(2)四組動物死亡率、梗死面積、心率、血壓、LVSP和+dp/dtmax/LVSP以及左、右室實際重量、左室球形指數(shù)和擴張指數(shù)均無顯著差異；三個治療組LVEDP顯著降低、±dp/dtmax顯著升高，左室相對重量顯著減輕，梗死區(qū)Ⅰ、Ⅲ型膠原容積分數(shù)顯著降低，血管數(shù)目顯著增加。與MSCs治療組相比，HGF治療組除-dp/dt

5、max/LVSP、室間隔厚度以及血管密度有顯著差異之外，其余指標均無顯著差異。MSCs+HGF治療組與MSCs治療組和HGF治療組相比，左、右室相對重量和室間隔厚度以及血管密度有顯著差異，血流動力學(xué)、膠原容積分數(shù)和心功能指標均無顯著差異。 結(jié)論：同種異體移植的BM-MSCs能在梗死心肌存活；HGF對移植細胞在梗死心肌的存活無明顯影響；MSCs和HGF以及兩者聯(lián)合治療急性心肌梗死，均能通過促進梗死區(qū)血管新生，降低局部膠原沉積，顯著