同種異體移植骨髓間充質(zhì)干細胞對大鼠重癥急性胰腺炎的影響.pdf

1、目的:
　　 探討同種異體移植骨髓間充質(zhì)干細胞后對大鼠重癥急性胰腺炎(SAP)胰腺及炎癥因子的影響,以進一步明確間充質(zhì)干細胞治療重癥急性胰腺炎的可能機制。
　　 方法:
　　 首先提取出生后14天的雄性Sprague—Dawley(SD)大鼠的全骨髓細胞,經(jīng)分離、純化后,培養(yǎng)至第3代經(jīng)鑒定為骨髓間充質(zhì)干細胞后備后續(xù)實驗用；將84只健康雌性Sprague—Dawley大鼠,體質(zhì)量200±20g,隨機分為假手術(shù)組(s

2、ham operation group,S組)、SAP對照組(severe acute pancreatitisgroup,SAP組)和治療組(bone marrow mesenchymal cells transplant group,B組)。通過從胰腺被膜下多點緩慢均勻注射1ml4％牛磺膽酸鈉的方法建立SAP模型。S組和B組分別于造模后24小時經(jīng)尾靜脈注射間充質(zhì)干細胞懸液1ml(PBS重懸,濃度為1.0×106個/mL),SAP組注

3、射1mlPBS。于注射后第1、7、14d三個時間點采用腹主動脈放血法將大鼠分批處死(每次每組6只),收集血清標(biāo)本進行血清淀粉酶、TNF—α、IL—10檢測；同時將部分胰腺組織置于10％中性甲醛溶液中固定,在光鏡下觀察胰腺的病理學(xué)改變并作病理評分；ELISA法檢測TNF—α、IL-10,并觀察同種異體移植間充質(zhì)干細胞對上述各指標(biāo)的影響。對相關(guān)數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、自幼鼠骨髓提取的全骨髓細胞分離培養(yǎng)后

4、8小時即可看到有少量貼壁,第7天后即可達到90％融合,傳至第三代后鏡下可見形態(tài)均一、排列整齊的梭形細胞為主的細胞群。
　　 2、經(jīng)流式細胞術(shù)檢測培養(yǎng)至第三代細胞表達率CD29+99.02％、CD44+80.86％、CD45+0.97％。
　　 3、移植后24小時,在B組及S組大鼠胰腺組織中均可檢測到Sry基因片段,B組大鼠第7天、14天Sry基因表達明顯增強,S組較前無明顯變化。
　　 4、血清淀粉酶變化:SAP

5、、B組血清淀粉酶在建模后各時間點與S組比較均明顯升高,有顯著差異(P<0.01);移植第24小時后B組血清淀粉酶水平較SAP組低,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；移植后7天血清淀粉酶B組與SAP組比較,淀粉酶含量明顯降低(P<0.01)。
　　 5、胰腺組織學(xué)評分:①S組建模后各時間點組織學(xué)評分低,且無顯著變化。②SAP、B組各時間點組織學(xué)評分與S組比較明顯升高,均有顯著性差異(P<0.01)。③移植第1、7天后B組組織學(xué)評分低

6、于SAP組,但無統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；在移植后14天B組與SAP組相比組織學(xué)評分有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。
　　 6、血清TNF—α水平變化:①S組大鼠血清TNF—α水平較低,在建模后各時間點無明顯變化,與SAP、B組相比明顯較低,有顯著差異(P<0.01)。②B組與SAP組相比第1天無顯著差異(P>0.05)；第7天B組血清TNF—α水平低于SAP組(P<0.05);在14天時B組血清TNF—α水平明顯低于SAP組(

7、P<0.01)。
　　 7、血清IL—10水平變化:①S組大鼠血清IL-10水平極低,在建模后各時間點無顯著性變化,且在各時間點上明顯低于SAP、B組(P<0.01)。②B、SAP組第1天無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；第7天、14天時B組血清IL-10水平明顯高于SAP組(P<0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1、應(yīng)用全骨髓差速貼壁培養(yǎng)法可以得到純化的骨髓間充質(zhì)干細胞。
　　 2、移植的骨髓間充質(zhì)干細胞可