清胰湯協(xié)同骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎致肺損傷的治療作用.pdf

1、目的:
　　通過觀察中藥方劑清胰湯與移植同源骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠重癥急性胰腺炎(SAP)所致肺損傷的影響，探討二者協(xié)同保護(hù)ALI作用及其可能的機(jī)制。
　　方法:
　　Sprague-Dawley SD)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stemcells，BMSCs)體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增，觀察記錄大鼠BMSCs增殖規(guī)律及表面抗原CD34、CD45、CD29、CD90的表達(dá)。體外構(gòu)建

2、肺組織細(xì)胞直接共培養(yǎng)體系，脂多糖(LPS)誘發(fā)肺細(xì)胞損傷。取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基(CompleteCondition Medium，CCM)、正常肺細(xì)胞培養(yǎng)基(Normal lung cell ConditionMedium，NCM)、受損肺細(xì)胞培養(yǎng)基(Injury lung cell Condition Medium，ICM)、清胰湯含藥血清培養(yǎng)基(Qingyi Decoction Condition Medium，QCM)及受

3、損肺細(xì)胞和清胰湯含藥血清培養(yǎng)基（Injury lung cell and Qingyi Decoction ConditionMedium，IQCM）誘導(dǎo)BMSCs向肺組織細(xì)胞分化，免疫熒光細(xì)胞化學(xué)鑒定肺泡Ⅰ型細(xì)胞水通道蛋白-5（Aquaporins-5，AQP-5）、肺泡Ⅱ型細(xì)胞表面蛋白C(Surfactant Protein C，SP-C)表達(dá)。健康SD大鼠125只，隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham operated group，Sham

4、 group，n=25）、急性胰腺炎組(severe acute pancreatitismodel group，SAP group，n=25)、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組(Bone-Mesenchymal stemcells group，BMSCs group，n=25)、清胰湯組(Qingyi Decoction，QYD group，n=25)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞加清胰湯組(Bone-Mesenchymal stem cells plus Q

5、ingyiDecoction group，BMSCs+ QYD group，n=25)。采用改良的膽胰管逆行注射法制備重癥急性胰腺炎肺損傷(SAP-ALI)模型。分別于造模后24小時(shí)，觀察大鼠行為學(xué)特征變化及死亡率，肺組織病理學(xué)改變，肺濕/干重比值(Wet-Dry weightratio，W/D)，測定血清淀粉酶、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)的含量，

6、ELISA檢測血清及肺組織勻漿Interleukin-1(IL-6)、Tumor Necrosis Factor(TNF-α)含量， PCR法鑒定肺泡細(xì)胞表面蛋白SP-A、SP-B、SP-C、水通道蛋白5(Aquaporins-5，AQP-5)mRNA表達(dá)，Western blotting法鑒定SP-C、AQP-5蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1、倒置光鏡下觀察大鼠BMSCs胞漿豐富，核胞比正常，呈長纖維細(xì)胞狀，細(xì)胞排列成

7、束狀、螺旋狀。流式細(xì)胞儀鑒定結(jié)果:BMSCs表面分子CD34-、CD45-，CD29+、CD90+。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)檢測:AQP-5、SP-C陽性細(xì)胞在ICM、IQCM中表達(dá)，在NCM、CCM、QCM組中均表達(dá)陰性，IQCM組BMSCs向肺泡Ⅰ型細(xì)胞、肺泡Ⅱ型細(xì)胞分化率均較ICM組顯著性高(P＜0.01)。
　　2、與SAP組比較，給予清胰湯或BMSCs可降低重癥急性胰腺炎大鼠的死亡率(p＜0.05)，顯著減輕其肺組織的病理性損傷

8、，降低血清淀粉酶活性、MDA、IL-6、TNF-α水平(p＜0.05)，上調(diào)SP-A、SP-B、SP-C及AQP-5的mRNA及SOD水平，SP-C及AQP-5蛋白的表達(dá)顯著增高。炎癥介質(zhì)、氧化應(yīng)激因子的減少及肺組織相關(guān)蛋白的增多在QYD+BMSCs組與QYD組及BMCSs組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.LPS體外損傷肺組織細(xì)胞能誘導(dǎo)大鼠BMSCs向肺泡Ⅰ、Ⅱ型細(xì)胞分化。
　　2.清胰湯可