骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)急性肺損傷大鼠的治療作用.pdf

1、研究背景：創(chuàng)傷在世界范圍內(nèi)是第四位致死原因，是青少年的首位死因。創(chuàng)傷因其致殘率高，對(duì)心理及精神損害大，給社會(huì)、家庭及個(gè)人造成嚴(yán)重負(fù)擔(dān)，因此不僅是醫(yī)學(xué)界更是全社會(huì)面臨的緊要難題。創(chuàng)傷后患者常常合并局部或系統(tǒng)性感染，更加大了其治療及康復(fù)的難度。胸部創(chuàng)傷是創(chuàng)傷致死的第二位原因，其致死率可達(dá)8.5％，僅次于顱腦損傷導(dǎo)致的死亡。而肺臟又是占據(jù)胸腔大部分體積的重要器官，極易在胸部創(chuàng)傷中受損。若在肺損傷的基礎(chǔ)上伴發(fā)嚴(yán)重感染、機(jī)體發(fā)生不可控制的全身炎癥

2、反應(yīng)綜合征，則會(huì)在原有呼吸困難的基礎(chǔ)上發(fā)生肺臟水腫伴隨透明膜形成，造成頑固性低氧血癥即出現(xiàn)急性肺損傷(acute lung injury,ALI)，嚴(yán)重者可發(fā)生急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)。臨床上針對(duì)上述情況的治療主要包括：治療原發(fā)疾病、積極抗感染、給予機(jī)械輔助呼吸及維持體內(nèi)液體平衡。但是目前的治療手段對(duì)改善ALI/ARDS患者的生存狀況效果十分有限，ALI/AR

3、DS患者的死亡率仍維持在40％左右。因此急需突破傳統(tǒng)尋找新的更有效的治療方法。間充質(zhì)干細(xì)胞由于其獨(dú)特的調(diào)節(jié)系統(tǒng)免疫及炎癥反應(yīng)的功能，近年來在一些難治感染性臨床綜合征中的優(yōu)勢(shì)效應(yīng)日益凸顯。然而目前尚未有文獻(xiàn)報(bào)道其在胸部創(chuàng)傷后合并全身感染中的治療效應(yīng)。因此，本研究應(yīng)用大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療胸部創(chuàng)傷后感染動(dòng)物，初步探索其在臨床中的應(yīng)用潛能。
　　 方法：
　　 1.采用全骨髓貼壁法獲取大鼠原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)細(xì)胞表面標(biāo)記

4、及多向分化能力檢測(cè)確定其符合間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)。通過機(jī)械擦除寬大扁平細(xì)胞結(jié)合低密度接種優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)條件，對(duì)優(yōu)化后的細(xì)胞進(jìn)行集落形成能力、增殖能力及細(xì)胞周期分析檢驗(yàn)其生物學(xué)行為。
　　 2.通過胸部撞擊復(fù)合內(nèi)毒素注射建立急性肺損傷大鼠模型，尾靜脈輸注異體間充質(zhì)干細(xì)胞并觀察動(dòng)物死亡率變化以及肺臟呼吸功能、局部炎癥和病理形態(tài)的改善。
　　 3.通過控制手術(shù)參數(shù)建立不同嚴(yán)重程度的盲腸結(jié)扎穿孔致膿毒癥大鼠模型，觀察異體間充質(zhì)干細(xì)胞移

5、植對(duì)其死亡率的影響。
　　 結(jié)果：1. 利用全骨髓貼壁法可獲得大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。其表面標(biāo)記符合標(biāo)準(zhǔn)，具有向脂肪、骨及軟骨細(xì)胞分化的能力。經(jīng)機(jī)械擦除寬大扁平細(xì)胞，結(jié)合常規(guī)接種密度的十分之一的較低密度接種，可以獲得形態(tài)均一、活力良好、生物學(xué)行為更佳的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。
　　 2.胸部撞擊后復(fù)合靜脈注射內(nèi)毒素可建立病理形態(tài)上符合急性肺損傷的動(dòng)物模型。
　　 3.同種異體間骨髓充質(zhì)干細(xì)胞可以降低急性肺損傷大鼠死亡

6、率、改善肺臟氧合功能、減少肺內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、降低肺部促炎癥因子水平而增加抗炎因子分泌、改善肺臟病理損傷。
　　 4.通過尾靜脈移植的同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以在傷后14天內(nèi)停留于受損肺組織內(nèi)，其數(shù)量隨時(shí)間延長(zhǎng)而減少。
　　 5.在盲腸結(jié)扎穿孔致膿毒癥的動(dòng)物手術(shù)中：可通過控制盲腸結(jié)扎范圍、穿孔數(shù)量及每孔擠出糞便量，獲得不同嚴(yán)重程度、不同死亡率的膿毒癥大鼠模型。
　　 6. 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植能降低雌性膿毒癥大鼠