骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)慶大霉毒所致大鼠急性腎損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：觀察輸注外源性骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stemcells，MSCs)對(duì)慶大霉素(Gentamycin，GM)誘導(dǎo)的大鼠急性腎損傷是否具有保護(hù)作用，并初探其機(jī)制。
　　 方法：1．MSCs的分離培養(yǎng)與鑒定：本實(shí)驗(yàn)對(duì)傳統(tǒng)的貼壁培養(yǎng)法進(jìn)行改進(jìn)，分離純化大鼠MSCs，體外培養(yǎng)和連續(xù)傳代，在倒置顯微鏡下連續(xù)觀察細(xì)胞的形態(tài)變化；流式細(xì)胞儀(FCM)鑒定MSCs膜抗原。2．大鼠藥源性急性腎損傷模型制備：腹腔注射慶大霉素

2、100mg/kg，連續(xù)7d，制備大鼠急性腎損傷模型。3．測(cè)定血清BUN和Cr含量評(píng)價(jià)腎功能。4．HE染色方法光鏡下觀察腎組織病理形態(tài)學(xué)改變，TUNEL法檢測(cè)腎小管上皮細(xì)胞凋亡。5．免疫印跡法及RT-PCR檢測(cè)腎組織中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)及其mRNA表達(dá)，免疫印跡法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Fas和FasL的表達(dá)水平。6．實(shí)驗(yàn)分組：大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、生理鹽水組、MSCs輸注組；MSCs輸注組和生理鹽水組分別尾靜脈注射MSCs1×1

3、06和等體積生理鹽水。
　　 結(jié)果：1．原代分離的大鼠MSCs在接種后48h貼壁，細(xì)胞形態(tài)為橢圓形、多角形及短梭形，10天時(shí)細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形并達(dá)到90％單層融合，經(jīng)傳代擴(kuò)增，細(xì)胞進(jìn)一步純化； FCM檢測(cè)CD44、CD90陽(yáng)性率分別為98.42±1.14％、97.6±1.85％；表明所獲得的細(xì)胞為MSCs。2．與正常對(duì)照組相比，腹腔注射慶大霉素所致模型組大鼠血清BUN和Cr含量明顯升高(P＜0.01)，腎組織損傷嚴(yán)重，凋亡的腎小管上皮

4、細(xì)胞明顯增多，表明慶大霉素所致急性腎損傷大鼠模型制備成功。3．MSCs輸注可以明顯降低慶大霉素所致急性腎損傷大鼠血清BUN和Cr含量(P＜0.01)，減輕腎組織病理形態(tài)學(xué)改變，明顯減少凋亡的腎小管上皮細(xì)胞，上調(diào)HGF的表達(dá)(P＜0.01)，下調(diào)Fas和FasL的表達(dá)(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：本研究對(duì)傳統(tǒng)的貼壁分離法進(jìn)行改進(jìn)，能有效分離純化大鼠MSCs;MSCs輸注可減輕慶大霉素所致大鼠急性腎損傷腎臟病理形態(tài)學(xué)改變，改善腎功