GSK-3β在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠急性肺損傷中的調(diào)控機(jī)制.pdf

1、背景:急性肺損傷(ALI)是一種嚴(yán)重的疾病,也是造成危重患者出現(xiàn)并發(fā)癥與死亡的主要因素之一。目前最常用于治療ALI的方法是機(jī)械通氣,機(jī)械通氣能夠?yàn)槲Ｖ鼗颊咛峁┍匾纳С?但是會(huì)導(dǎo)致肺功能和結(jié)構(gòu)的改變。間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)療法是一種很有前景的新療法,被認(rèn)為能夠治療急性肺損,但是其治療機(jī)制尚不明確。糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)與多種疾病的發(fā)生有關(guān),因此假設(shè)GSK-3β能夠作為急性肺損傷的治療靶點(diǎn)。目前的研究中,我們側(cè)重于探究

2、可能增強(qiáng)干細(xì)胞療效的因素,哪些能夠改善干細(xì)胞治療的療效。本研究旨在探索在體內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞用于治療急性肺損傷中,聯(lián)合使用GSK-3β選擇性抑制劑LiCl的作用。
　　方法:實(shí)驗(yàn)選用40只成年SD大鼠,隨機(jī)分為4組:1.對(duì)照組(5mg/kg生理鹽水),n=10.2.急性肺損傷組(ALI)(15mg/kg脂多糖(LPS)),n=10.3.ALI+MSCs組(LPS作用2h后,尾靜脈注射MSCs治療),n=10.4.ALI+MSCs+Li

3、Cl組(LPS作用2h后,MSCs和20mg/kg LiCl治療).實(shí)驗(yàn)中,每隔24h注射一次LiCl以保持血藥濃度。在第12h收集血清,用ELSA方法檢測(cè)炎癥細(xì)胞因子的濃度變化。實(shí)驗(yàn)第7天采集肺組織,RT-PCR方法檢測(cè)肺泡上皮細(xì)胞膜蛋白A,C(SP-A,C)的基因表達(dá)以確定肺泡上皮Ⅱ型細(xì)胞的變化,以及Wnt/β-catenin信號(hào)通路上的β-catenin和GSK-3β基因表達(dá)情況。分別在第7、14天利用WB、蘇木素和馬松染色方法分

4、別檢測(cè)β-catenin蛋白的表達(dá)情況和肺組織變化。最后,用形態(tài)學(xué)分析表示膠原纖維的面積百分比。
　　結(jié)果:結(jié)果顯示,在LPS模型中,用GSK-3β抑制劑(LiCl)輔助MSCs治療組可更有效的抑制血清中的炎癥因子的表達(dá),且SP-C的mRNA的表達(dá)顯著升高。此外,實(shí)驗(yàn)第7天,與MSCs組相比,MSCs聯(lián)合LiCl組的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度,肺水腫,病理損傷和膠原沉積均顯著下降。第14天與第7天相比,肺組織中β-catenin的蛋白表達(dá),