旁分泌機(jī)制在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠急性心肌梗死中作用的研究.pdf

1、目的：研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液對(duì)心梗后心功能的影響，對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響；檢測(cè)干細(xì)胞在缺血缺氧作用下分泌的細(xì)胞因子，探索旁分泌機(jī)制在干細(xì)胞治療心肌梗死中的作用。
　　 方法：取8周齡SD大鼠的脛骨及股骨無菌條件下分離骨髓，用全骨髓差異貼壁法分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Mesenchymal Stem Cells，BMSCs)，并取第3代干細(xì)胞，用終濃度20umol/LBrdU標(biāo)記72h，備用。采用開胸結(jié)扎前降支建立

2、SD大鼠心肌梗死模型。實(shí)驗(yàn)分組，SD大鼠20只，雌雄不拘，隨機(jī)分為4組：A組：對(duì)照組，建模成功2周后經(jīng)尾靜脈輸注生理鹽水200ul；B組：DMEM/F12組，結(jié)扎前降支，2周后經(jīng)尾靜脈輸注無血清培養(yǎng)基200ul；C組：MSCs組，建模成功2周后經(jīng)尾靜脈輸注骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞1×106/200ul；D組：條件培養(yǎng)液組，建模成功2周后經(jīng)尾靜脈輸注條件培養(yǎng)液200ul；各組于心梗前、心梗后、移植后心臟超聲評(píng)估心功能，干細(xì)胞、條件培養(yǎng)液移植后4周

3、獲取動(dòng)物心臟，并通過Ⅷ因子免疫組化染色計(jì)數(shù)不同組動(dòng)物新生毛細(xì)血管密度，TTC法計(jì)算心肌梗死面積，采用TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率，采用BrdU免疫組化檢測(cè)歸巢到心肌內(nèi)干細(xì)胞，ELISA法對(duì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)液的細(xì)胞因子進(jìn)行定性、定量分析。
　　 結(jié)果：(1)多普勒超聲心動(dòng)圖檢測(cè)心梗前后心功能：與A組、B組比較，C組、D組移植后4周LVEDd、LVEDs、EF改善明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(2)SD大鼠心梗后梗死面積檢測(cè)：

4、與A組、B組比較，C組、D組，梗死面積顯著減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(3)各組心肌細(xì)胞凋亡率比較：C組、D組和A組、B組比較，凋亡率明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(4)Ⅷ因子免疫組化檢測(cè)各組新生血管密度變化結(jié)果顯示，C組、D組新生血管明顯增多，與A組、B組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(5)BrdU免疫組化檢測(cè)結(jié)果，C組觀察到歸巢的骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞，A、B、D組均未發(fā)現(xiàn)；(6)ELISA檢測(cè)到干細(xì)胞