同種異體骨髓間充質(zhì)干細胞治療重癥急性胰腺炎腎損害效果評價及對毛細血管滲漏干預機制的實驗研究.pdf

1、目的:本研究旨在通過經(jīng)鑒定的同種異體骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植到重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)腎損害的動物模型體內(nèi),觀察MSCs對SAP合并腎損害的治療效果,并探討其對毛細血管滲漏的干預機制,為MSCs用于治療SAP合并腎損害提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、建立SAP腎損害的大鼠模型,檢測腹水量、腹水淀粉酶(amylase,

2、AMY),血清AMY、肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(urea nitrogen,BUN)以及腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平變化,觀察胰腺、腎臟病理形態(tài)及毛細血管內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)變化;
　　2、體外培養(yǎng)MSCs,通過細胞形態(tài)檢測、生長曲線觀察,細胞表面抗原流式鑒定以及體外定向誘導分化法結(jié)合檢測來所培養(yǎng)的細胞;

3、>　　3、通過MSCs移植到SAP動物體內(nèi),檢測血清AMY、Cr、BUN以及TNF-α、IL-1β水平,觀察胰腺、腎臟病理形態(tài)及毛細血管內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)變化,并檢測胰腺、腎臟組織中水通道蛋白1(aquaporin1,AQP1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、血管擴張刺激磷蛋白(vasodilator stimulated phosphoprotein,VASP)mRNA及蛋白水平改變

4、。
　　結(jié)果:
　　1、膽胰管逆行注射?；悄懰徕c配合膽胰管結(jié)扎法能成功建立SAP合并腎損害的動物模型;SAP合并腎損害發(fā)生時,腹水量增加,腹水AMY、血清AMY、Cr、BUN、TNF-α、IL-1β明顯升高,胰腺以及腎臟組織出現(xiàn)毛細血管內(nèi)皮屏障的破壞,并隨時間增加而破壞加重;
　　2、全骨髓貼壁法和密度梯度離心法聯(lián)合培養(yǎng)的細胞形態(tài)典型,高度表達CD29、CD90,低表達CD34、45,且能被誘導分化為成骨、成脂細胞,符

5、合MSCs特性;CM-Dil對其染色,染色熒光強,且細胞活性未見明顯下降;
　　3、MSCs可抑制血清TNF-α、IL-1β的過度表達,抑制SAP大鼠胰腺、腎臟中AQP1、VASPmRNA及蛋白的下降,抑制SAP大鼠胰腺、腎臟中MMP-9mRNA及蛋白的升高,減輕SAP大鼠胰腺、腎臟毛細血管內(nèi)皮屏障的破壞。
　　結(jié)論:在SAP腎損害發(fā)生時,移植的MSCs能夠歸巢到胰腺、腎臟受損區(qū)域,抑制炎癥因子過度表達,調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細胞結(jié)構(gòu)