同種異體與同基因骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）體內(nèi)移植免疫反應(yīng)的比較研究.pdf

1、目的：比較同種同基因與同種異基因骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)體內(nèi)移植的免疫反應(yīng)，通過(guò)比較兩者間的差異來(lái)研究同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞皮下移植是否存在免疫反應(yīng)，探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞異體移植的可能性。 方法：分別取6周齡BALB/C品系小鼠和轉(zhuǎn)EGFP基因的C75BL\6品系小鼠的骨髓，應(yīng)用全骨髓培養(yǎng)+差速貼壁分離法獲取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)穩(wěn)定傳代至第五代后，以相同的濃度融入藻酸鈉溶液中，構(gòu)建MSC—藻酸鈣復(fù)合物，植入BALB/C品系小

2、鼠背部皮下，另單純?cè)逅徕}植入作為陰性對(duì)照。分別于1．2．4．8周取小鼠外周血行流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群變化，同時(shí)將小鼠背部植入物取出，做冰凍切片，行HE及CD4、CD8抗原免疫組化染色，觀(guān)察植入物內(nèi)T淋巴細(xì)胞亞群的變化，帶有GFP蛋白的細(xì)胞組切片在熒光顯微鏡下觀(guān)察并計(jì)數(shù)存活細(xì)胞數(shù)。 結(jié)果：流式細(xì)胞儀檢測(cè)MSCs表達(dá)MHC-Ⅰ類(lèi)分子，不表達(dá)MHC-Ⅱ類(lèi)分子及CD40、B7(CD80/CD86)等T細(xì)胞活化的協(xié)同信號(hào)分子。外周血

3、T淋巴細(xì)胞亞群分析：P、G組血標(biāo)本各時(shí)間段CD4<'+>/CD8<'+>比值及CD4<'+>值無(wú)差異，1周及4周CD8<'+>值無(wú)差異，2周時(shí)G組CD8<'+>高于P組(P<0.05)。免疫組化檢查顯示試驗(yàn)組1、2周時(shí)標(biāo)本可見(jiàn)CD4<'+>，CD8<'+>細(xì)胞少量表達(dá)，以2周時(shí)較為明顯，4周時(shí)明顯減少，8周時(shí)基本消失，同種異體與同種同基因組淋巴細(xì)胞亞群變化無(wú)顯著差異。熒光顯微鏡下見(jiàn)表達(dá)GFP蛋白的MSCs隨著植入時(shí)間的增加逐漸減少，初期