人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療卵巢早衰的初步實驗研究.pdf

1、卵巢早衰(Prematureovarianfailure,POF)是指婦女青春期發(fā)育后若在40歲前發(fā)生閉經(jīng)、卵巢萎縮、體內(nèi)雌激素水平低落、促性腺激素水平高達(dá)絕經(jīng)期水平的現(xiàn)象。POF已經(jīng)成為當(dāng)今婦女不孕癥的最主要病因。本研究旨在構(gòu)建小鼠卵巢早衰模型，以此為基礎(chǔ)研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞及其濃縮液治療卵巢早衰的可行性；初步探討了人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞改善卵巢功能的可能機(jī)制。論文分為四部分，第一部分為人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對卵巢早衰治療作用的研究；第二部

2、分是人臍帶間充干細(xì)胞濃縮液對卵巢早衰治療作用的研究；第三部分是人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞及其濃縮液對卵巢早衰卵母細(xì)胞的作用；第四部分人臍帶間充干細(xì)胞對卵巢早衰治療作用分子機(jī)制的初步研究。
　　一、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對卵巢早衰治療作用的研究
　　目的：應(yīng)用人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（umbilicalcordMesenchymalstemcells,UCMSCs）治療小鼠卵巢早衰模型，觀察治療效果。方法：將野生型美國癌癥研究所(Institu

3、teofCancerResearcch,ICR)選育的小鼠隨機(jī)分為A、B、C、D四組(n=20只),A、B、C三組小鼠采用環(huán)磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)致卵巢早衰，A組不經(jīng)任何救治，B組在卵巢原位注射UCMSCs，C組小鼠經(jīng)尾靜脈注射UCMSCs，D組為空白對照組。比較四組之間卵泡數(shù)量、卵巢組織HE染色，卵巢組織內(nèi)凋亡細(xì)胞數(shù)量等檢測指標(biāo)的差異，以此來觀察UCMSCs對卵巢早衰的治療效果。結(jié)果：成功建立了UCMSCs

4、體系；成功建立了環(huán)磷酰胺致小鼠卵巢早衰模型；經(jīng)過治療的POF小鼠卵泡數(shù)量和質(zhì)量均得到明顯改善，凋亡細(xì)胞的數(shù)量明顯減少。結(jié)論：本次研究表明，UCMSCs對于小鼠CTX所致卵巢早衰有明顯的治療作用，可能通過改善卵泡數(shù)量和質(zhì)量以及減少卵巢內(nèi)凋亡的細(xì)胞數(shù)來有效改善卵巢功能。
　　二、人臍帶間充干細(xì)胞濃縮液對卵巢早衰治療作用的研究
　　目的：應(yīng)用UCMSCs濃縮液治療小鼠卵巢早衰模型，觀察治療效果。方法：選擇生長最為旺盛的UCMSCs

5、將其培養(yǎng)基更換為無血清培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48小時后搜集培養(yǎng)基，作為濃縮液(Conditionedmedium,CM)備用；將野生型ICR小鼠隨機(jī)分為A、B、C、D四組(n=20只)，A、B、C三組小鼠采用化療藥物CTX致卵巢早衰，A組不經(jīng)任何救治，B組小鼠經(jīng)尾靜脈注射CM，C組小鼠經(jīng)尾靜脈注射無血清培養(yǎng)基(ChemicallyDefinedMesenchymalStemCellGrowthMedium,MSCGD)，A、D兩組小鼠經(jīng)尾靜脈

6、注射同等劑量的PBS，D組為空白對照組。比較四組之間卵泡數(shù)量、卵巢組織HE染色，卵巢組織內(nèi)凋亡細(xì)胞數(shù)量等檢測指標(biāo)的差異。結(jié)果：成功獲取了UCMSCs濃縮液；經(jīng)過治療的POF小鼠卵泡數(shù)量和質(zhì)量均得到明顯改善，凋亡細(xì)胞的數(shù)量明顯減少。結(jié)論：本次研究表明，CM對于小鼠CTX所致卵巢早衰有明顯的治療作用，推測是CM中UCMSCs分泌的一些因子起到了改善卵泡數(shù)量和質(zhì)量以及減少卵巢內(nèi)凋亡的細(xì)胞的作用，并借此有效改善了卵巢功能。
　　三、人臍帶

7、間充質(zhì)干細(xì)胞及其濃縮液對卵巢早衰卵母細(xì)胞的作用
　　目的：應(yīng)用UCMSCs及其濃縮液治療小鼠免疫損傷卵巢，觀察治療效果。方法：將小鼠分為A、B、C、D、E、F六組(n=20只)，A、C、D、E四組皮下多點注射小鼠透明帶肽和弗氏完全佐劑(Zonapellucida,ZP3+completeFreund’sadjuvant,CFA)誘導(dǎo)卵巢免疫損傷，A組不經(jīng)任何救治，C組經(jīng)尾靜脈注射UCMSCs，D組經(jīng)尾靜脈注射CM，E組經(jīng)尾靜脈注射

8、MSCGD，B組皮下多點注射CFA，F(xiàn)組為空白對照組。通過觀察卵泡的數(shù)量和質(zhì)量、卵母細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)量來觀察UCMSCs及其濃縮液對卵巢早衰的治療效果。結(jié)果：成功建立了小鼠卵巢早衰免疫模型；經(jīng)過治療的免疫模型小鼠卵母細(xì)胞數(shù)量明顯升高，死亡的卵母細(xì)胞數(shù)明顯減少，卵泡數(shù)量并未出現(xiàn)明顯改善但質(zhì)量有所提高。結(jié)論：UCMSCs及其濃縮液對小鼠卵巢早衰免疫模型有治療作用，主要是對卵母細(xì)胞質(zhì)量和數(shù)量有很大改善。對于治療免疫因素導(dǎo)致卵巢早衰的病人，恢復(fù)病

9、人的生育能力提供了新的思路。
　　四、人臍帶間充干細(xì)胞對卵巢早衰治療作用分子機(jī)制的初步研究
　　目的：應(yīng)用UCMSCs治療環(huán)磷酰胺致小鼠卵巢早衰模型，探討兩者改善卵巢功能的具體機(jī)制。方法：將ICR小鼠隨機(jī)分為A、B、C三組(n=20只)，A、B組小鼠采用CTX致卵巢早衰，A組不經(jīng)任何救治，B組小鼠經(jīng)尾靜脈移植UCMSCs，C組小鼠為空白對照組。通過基因芯片分析A、B、C三組小鼠卵巢組織中基因表達(dá)譜的差異。結(jié)果：基因芯片篩選出