人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療肢體火器傷的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　1.探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(humanumbilicalcord-derivedmesenchymalstemcells,hUCMSCs)體外分離、純化和培養(yǎng)方法,并鑒定其生物學(xué)特性,為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。
　　2.采用不同投射物對(duì)豬后肢肌肉軟組織進(jìn)行致傷,評(píng)估、建立一種局部傷情穩(wěn)定性高、可重復(fù)性好、實(shí)戰(zhàn)模擬性強(qiáng)的火器傷動(dòng)物模型,為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。
　　3.提出一種新的火器傷治療方法:局部清創(chuàng)引流+局部注射

2、hUCMSCs,并在豬后肢火器傷模型中評(píng)價(jià)其療效。
　　方法:
　　1.采用組織塊貼壁法從健康產(chǎn)婦臍帶中分離hUCMSCs,傳代培養(yǎng)后光鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察,通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原,并檢測(cè)hUCMSCs成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)分化的潛能。
　　2.分別采用“五六”式彈道槍發(fā)射7.62mm制式彈及“五三”式滑膛槍發(fā)射鋼制球形破片射擊8只隨機(jī)分配的長(zhǎng)白豬雙側(cè)后肢,通過(guò)觀察傷情、傷道入出口面積、傷道最大橫截面積、傷道

3、組織病理學(xué)分區(qū),計(jì)算傷道組織細(xì)菌計(jì)數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)模型傷情的穩(wěn)定性。
　　3.取長(zhǎng)白豬20只,7.62mm制式彈致傷后隨機(jī)分為2組:手術(shù)清創(chuàng)引流+hUCMSCs注射組(A組)、手術(shù)清創(chuàng)引流+無(wú)菌生理鹽水注射組(B組)。通過(guò)檢測(cè)傷道組織細(xì)菌量、觀察組織病理學(xué)改變以及傷道愈合情況來(lái)評(píng)價(jià)各組的創(chuàng)傷愈合效果。
　　結(jié)果:
　　1.組織塊貼壁法分離的hUC-MSCs強(qiáng)表達(dá)CD90、CD29、CD73、CD105,弱表達(dá)CD106,不表達(dá)

4、CD45、CD34及HLA-DR,能夠分化為脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞。
　　2.兩種投射物均可造成傷情穩(wěn)定且具有良好可重復(fù)性的單純軟組織貫通傷,兩組間傷道入出口面積無(wú)顯著差異(p>0.05),但傷道最大橫截面積有顯著差異(p<0.05),兩種方法建立的動(dòng)物模型均具有典型火器傷病理學(xué)特點(diǎn),細(xì)菌計(jì)數(shù)檢測(cè)顯示傷道組織污染程度均較重,兩組間無(wú)顯著差異(p>0.05)。
　　3.致傷后經(jīng)不同處理,A組的傷道組織細(xì)菌量顯著低于B組(p

5、<0.05)。兩組間震蕩區(qū)病理學(xué)表現(xiàn)不同,A組炎癥反應(yīng)輕于B組,A組傷道愈合效果優(yōu)于B組。
　　結(jié)論:
　　1.組織塊貼壁法是一種理想的hUC-MSCs體外分離培養(yǎng)方法,根據(jù)這種方法培養(yǎng)出的hUC-MSCs純度高、生物學(xué)特征穩(wěn)定,可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。
　　2.2種投射物致傷效果相似,相比之下,采用“五六”式彈道槍發(fā)射7.62mm制式彈更適合模擬戰(zhàn)時(shí)真實(shí)傷情,適用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。
　　3.hUC-MSCs治療肢