人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、【背景與目的】人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical mesenchymal stem cells, HUMSCs）因其具有比骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞更強(qiáng)的增殖能力和更低的免疫排斥性，已成為目前替代療法、細(xì)胞移植和基因治療首選的成體干細(xì)胞類型。但近年來(lái)提出的體外培養(yǎng)的成體干細(xì)胞自發(fā)惡性轉(zhuǎn)化現(xiàn)象及腫瘤干細(xì)胞理論提示我們：HUMSCs在體外培養(yǎng)過(guò)程中可能存在“安全隱患”。本研究旨在探討HUMSCs惡性轉(zhuǎn)化的可能性，為其臨床應(yīng)用前的

2、安全性檢測(cè)提供可借鑒的檢測(cè)模式及探索有效的預(yù)防惡性轉(zhuǎn)化的方法。
　　【材料與方法】采用組織塊貼壁法獲得10批不同臍帶來(lái)源的HUMSCs；將第3代生長(zhǎng)良好的HUMSCs分成3組，基礎(chǔ)培養(yǎng)基組，DMSO培養(yǎng)組和3-甲基膽蒽（3-MCA）誘導(dǎo)組；通過(guò)觀察細(xì)胞的形態(tài)差異、生長(zhǎng)速度、存活時(shí)間、相對(duì)端粒長(zhǎng)度、端粒酶活性及染色體的變化情況檢測(cè)細(xì)胞是否進(jìn)行惡性轉(zhuǎn)化；將細(xì)胞注入裸鼠皮下，待包塊長(zhǎng)出后取出包塊組織行病理學(xué)免疫組化鑒定，并對(duì)其進(jìn)行腫瘤細(xì)

3、胞原代培養(yǎng)及單克隆純化。
　　【結(jié)果】10批基礎(chǔ)培養(yǎng)基組及DMSO培養(yǎng)組細(xì)胞生物學(xué)特征相似，細(xì)胞生長(zhǎng)速率隨著傳代次數(shù)增加逐漸變慢，傳代平均49天后均進(jìn)入細(xì)胞衰老期，并逐漸凋亡，細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯改變，檢測(cè)細(xì)胞端粒酶無(wú)活性，細(xì)胞相對(duì)端粒長(zhǎng)度逐漸縮短，染色體G顯帶同正常人染色體，裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)中裸鼠自然死亡均未見(jiàn)包塊生長(zhǎng)。10批3-MCA誘導(dǎo)組中僅2批細(xì)胞出現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化現(xiàn)象，表現(xiàn)出腫瘤細(xì)胞的特征：細(xì)胞形態(tài)變圓，密度高時(shí)成鋪路石樣、生長(zhǎng)存活時(shí)間