人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島素分泌細(xì)胞分化的初步研究.pdf

1、目的:探索人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞( Human Umbilical cord Wharton’ s Jelly-derived Mesenchymal Stem Cells,HUMSCs)在大鼠胰島細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境中及在糖尿病大鼠體內(nèi)向胰島素分泌細(xì)胞分化的潛能。
　　方法:①實(shí)驗(yàn)材料: SD大鼠由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。對(duì)動(dòng)物處置符合動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。臍帶取自汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科健康足月妊娠剖宮產(chǎn)的胎兒,產(chǎn)婦及家屬對(duì)

2、實(shí)驗(yàn)知情同意,并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。②實(shí)驗(yàn)方法:分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,并采用膠原酶消化法分離大鼠胰島細(xì)胞。將 HUMSCs與大鼠胰島細(xì)胞以半透膜相隔共同培養(yǎng),觀察HUMSCs的形態(tài)變化,在共培養(yǎng)的第3,7,14天采用放射免疫法檢測(cè)HUMSCs分泌的胰島素水平,RT-PCR方法檢測(cè)共培養(yǎng)的HUMSCs中的Pdx-1基因的表達(dá),以未共培養(yǎng)的HUMSCs做對(duì)照。用熒光染料Hoechst33258標(biāo)記HUMSCs,經(jīng)尾靜脈將HUMSCs

3、移植入糖尿病模型大鼠體內(nèi),一個(gè)月后取大鼠胰腺制作快速冰凍切片,熒光顯微鏡下觀察HUMSCs在胰腺組織中的定植情況。60天后取移植鼠的胰腺組織,采用半定量RT-PCR方法檢測(cè)人insulin基因的表達(dá)。
　　結(jié)果:體外研究:①共培養(yǎng)條件下的HUMSCs由長(zhǎng)梭形逐漸變圓,并聚集成團(tuán)。②放射免疫法結(jié)果表明,共培養(yǎng)組HUMSCs隨著共培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)分泌的胰島素量明顯增多,當(dāng)HUMSCs有聚集成團(tuán)傾向時(shí)可以隨葡萄糖刺激濃度的增高而分泌的胰島

4、素量也增高,與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)。③Pdx-1基因的RT-PCR結(jié)果表明未經(jīng)共培養(yǎng)的HUMSCs不表達(dá)Pdx-1,共培養(yǎng)3d的HUMSCs開始表達(dá)Pdx-1,共培養(yǎng)7d的HUMSCs仍表達(dá)Pdx-1,共培養(yǎng)14d的HUMSCs未表達(dá)Pdx-1。體內(nèi)研究:④熒光顯微鏡下看到移植標(biāo)記Hoechst33258的HUMSCs在大鼠的胰腺中呈均勻的點(diǎn)狀分部,發(fā)出藍(lán)色熒光,表明移植入體內(nèi)的HUMSCs可以在大鼠胰腺內(nèi)定植。⑤Insu