太湖豬成纖維細胞系和前脂肪細胞系的建立及前脂肪細胞的分化研究.pdf

1、本實驗以太湖豬為研究對象，采用組織塊法培養(yǎng)成纖維細胞系，膠原蛋白酶消化法培養(yǎng)前脂肪細胞系，并對所建細胞系進行了鑒定，包括細胞形態(tài)觀察、凍存前和復蘇后接種的存活率測定、生長曲線繪制、染色體核型分析等一系列的生物學特性分析。此外，采用50nmol/L胰島素、100nmol/L地塞米松、100nmol/L羅格列酮和0.25mmol/L1-甲基-3-異丁基黃嘌呤分化誘導已建立的前脂肪細胞，觀察其形態(tài)學變化，用油紅O染色法進行定性檢測，并通過測定

2、OD值確定誘導過程中細胞甘油三酯的變化情況。得到結果如下： 1.成纖維細胞呈梭形或不規(guī)則三角形，細胞先沿組織塊周圍生長，隨后向外伸展形成生長暈，傳代細胞與原代細胞在形態(tài)上無明顯差異。前脂肪細胞接種3～6h后開始貼壁，為典型的成纖維細胞樣。 2.成纖維細胞凍存前和復蘇后接種的存活率分別為96.5％和93.2％，前脂肪細胞分別為95.4％和92.3％。 3.成纖維細胞和前脂肪細胞的群體倍增時間均為72h，在體外的生長

3、增殖趨勢呈“S”型，經歷了潛伏期、指數(shù)增生期和停滯期三個階段，符合細胞在體外生長的一般規(guī)律。 4.對成纖維細胞和前脂肪細胞進行染色體分析得出：2n=38，XY，為穩(wěn)定的二倍體細胞系，不存在種間的交叉污染。 5.誘導分化過程中，第3d即可觀察到小脂滴，第4d有多個小脂滴，隨著分化進行大多數(shù)胞漿中的小脂滴聚集成葡萄串狀，細胞變成橢圓形或者圓形。大部分前脂肪細胞在第9～10d均成功的分化成為成熟的脂肪細胞，用油紅O染色呈紅色。