RepSox誘導牛成纖維細胞向脂肪細胞分化的研究.pdf

1、已有研究證明，小分子化合物 RepSox可上調(diào)mESCs的BMP-3水平，促進高效重編程。BMP-2、BMP-4具有誘導C3H10T1/2細胞向前脂肪細胞定向，經(jīng)誘導可分化為成熟脂肪細胞的能力。本研究將成纖維細胞定向分化為脂肪細胞，可為脂肪組織工程種子細胞的獲得和研究，提供重要的實驗參考。
　　實驗應用顯微觀察、分子生物學技術(shù)、流式細胞檢測技術(shù)、免疫組織化學等手段，分析定向分化過程中 BMP通路啟動情況，細胞處理前后的周期及凋亡現(xiàn)

2、象，增殖能力和細胞微絲骨架的變化情況，并首次從組蛋白修飾的角度研究細胞向前脂肪細胞定向的過程。
　　實驗結(jié)果：（1）15μM RepSox處理荷斯坦牛成纖維細胞3d，BMP2、Smad1、Smad2、Smad4表達量相對最高，微絲骨架結(jié)構(gòu)調(diào)整，逐漸以長線狀平行排列，可作為處理細胞條件；（2）處理組與對照組相比，細胞周期G0/G1期比例減少，S+G2/M期比例增加；染色體核型及細胞增殖能力正常；細胞H3S10磷酸化水平上升了95.6

3、％、S28減弱了26.3%、H3K9甲基化水平上升了74.7%、H3K27甲基化水平下降了47.4%、H3K9乙?；綔p弱了64.8%；（3）RepSox處理3d的細胞，更換含10%FBS+0.5 mM IBMX+10μg/ml胰島素+1.0μM地塞米松+200μM吲哚美辛的標準培養(yǎng)液誘導14天，成功向脂肪細胞定向分化，BMP2、Smad1、Smad2、Smad4基因開始沉默。成脂誘導2d時表達422/aP2基因，細胞數(shù)量增加至Rep