Notch信號通路在心肌成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用.pdf

1、【研究背景】
　　心肌成纖維細(xì)胞（CFs）過度增殖、轉(zhuǎn)分化為肌成纖維細(xì)胞(MFB)而表達(dá)α-平滑肌肌動蛋白（α-smoothmuscleactin，α-SMA）導(dǎo)致膠原合成分泌過多是心肌纖維化的重要病理基礎(chǔ)。轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）具有促進(jìn)CFs向MFB轉(zhuǎn)分化，上調(diào)α-SMA和促進(jìn)膠原合成等作用，是重要的促心肌纖維化細(xì)胞因子。心臟中腎素-血管緊張素系統(tǒng)(rennin-angiotensinsystem,RAS)的主要產(chǎn)物

2、血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)也能促進(jìn)心肌纖維化的形成。Notch信號通路通過受體與配體相互作用來精確調(diào)控細(xì)胞分化，在心血管發(fā)育生理、病理過程中起重要作用，已證實其參與調(diào)節(jié)了成纖維細(xì)胞向MFB的分化，但其在CFs向MFB轉(zhuǎn)分化過程中作用如何尚缺乏明確報道。
　　【研究目的】
　　1.觀察基礎(chǔ)狀態(tài)下CFs表達(dá)Notch各受體情況以及DAPT對CFs的α-SMA，HYP的作用，初步闡明Notch通路是否參與心

3、肌纖維化。
　　2.明確TGF-β1誘導(dǎo)CFs的α-SMA、HYP變化過程中Notch各受體的變化情況。
　　3.明確AngⅡ誘導(dǎo)CFs的α-SMA、HYP變化過程中Notch各受體的變化情況。
　　【研究內(nèi)容】
　　1.檢測基礎(chǔ)狀態(tài)下CFs表達(dá)Notch各受體情況以及分別使用DAPT不同作用濃度和不同作用時間對CFs的α-SMA、HYP的影響：分別采用實時定量PCR和蛋白印跡的方法檢測Notch各受體的基因和蛋

4、白水平；采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)和蛋白印跡的方法檢測α-SMA的表達(dá)；采用消化法測定HYP含量。
　　2.TGF-β1不同作用時間和作用濃度對CFs的α-SMA、HYP的影響以及在TGF-β1誘導(dǎo)CFs向MFB轉(zhuǎn)分化中Notch各受體的表達(dá)變化：采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)和蛋白印跡的方法檢測α-SMA的表達(dá)；采用消化法測定HYP含量；采用實時熒光定量PCR和蛋白印跡的方法檢測Notch各受體的基因和蛋白水平。
　　3.AngⅡ不同作用

5、時間和作用濃度對CFs的α-SMA、HYP的影響以及在AngⅡ誘導(dǎo)CFs向MFB轉(zhuǎn)分化中Notch各受體的表達(dá)變化：采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)和蛋白印跡的方法檢測α-SMA的表達(dá)；采用消化法測定HYP含量；采用實時熒光定量PCR和蛋白印跡的方法檢測Notch各受體的基因和蛋白水平。
　　【研究結(jié)果】
　　1.基礎(chǔ)狀態(tài)下CFs有Notch各受體基因和蛋白的表達(dá)；隨著DAPT作用濃度的增加和作用時間的延長CFs的α-SMA、HYP均呈

6、遞增趨勢。
　　2.TGF-β1可以上調(diào)CFs的α-SMA、HYP表達(dá)量，隨著TGF-β1作用濃度的增加和作用時間的延長α-SMA、HYP均呈遞增趨勢。但Notch1、Notch3、Notch4隨著TGF-β1作用時間的延長呈遞減趨勢，Notch2則無明顯變化。
　　3.AngⅡ可以上調(diào)CFs的α-SMA、HYP表達(dá)量，隨著AngⅡ作用濃度的增加和作用時間的延長α-SMA、HYP均呈遞增趨勢。但Notch1、Notch3、N

7、otch4隨著AngⅡ作用時間的延長呈遞減趨勢，Notch2表達(dá)則無明顯變化。
　　【研究結(jié)論】
　　1.Notch各受體基因和蛋白在基礎(chǔ)狀態(tài)下CFs上均有表達(dá)。DAPT阻斷Notch通路后，可以引起α-SMA、HYP的增加，導(dǎo)致CFs向MFB發(fā)生轉(zhuǎn)分化。Notch通路在CFs向MFB轉(zhuǎn)分化過程中可能具有重要作用。
　　2.TGF-β1能夠顯著增加CFsα-SMA、HYP的表達(dá)量，并且呈時間和劑量依賴效應(yīng)，可以誘導(dǎo)CF