黃芩苷對大鼠肺成纖維細(xì)胞及肌成纖維細(xì)胞CTGF和α-SMA表達(dá)的影響.pdf

1、目的:肺纖維化的病理特點(diǎn)是肺肌成纖維細(xì)胞異常增多，過度的細(xì)胞外基質(zhì)沉積。α-平滑肌肌動蛋白(smoothmuscleactin，α-SMA)是肌成纖維細(xì)胞(myofibroblast，MFB)的標(biāo)志物。轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transformingrowthfactor-beta，TGF-β1)是刺激成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化的主要細(xì)胞因子。結(jié)締組織生長因子（connectivetissuegrowthfactor，CTGF）是TGF-

2、β1的下游因子。肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞時(shí)，CTGF表達(dá)明顯增加。黃芩苷(Baicalin)是從中草藥黃芩中分離出來的一種黃酮類化合物，具有抗纖維化作用。但黃芩苷對于離體肺成纖維細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞CTGF及α-SMA蛋白表達(dá)的影響目前尚未見報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)通過離體培養(yǎng)大鼠肺成纖維細(xì)胞及肌成纖維細(xì)胞，觀察黃芩苷對肺成纖維細(xì)胞及肺肌成纖維細(xì)胞CTGF及α-SMA蛋白表達(dá)的影響，為黃芩苷在臨床肺纖維化中的防治提供研究資料。
　　

3、 方法:體外分離培養(yǎng)原代雄性SD大鼠(150-170g)肺成纖維細(xì)胞;用TGF-β誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞;MTT法測定黃芩苷對肺成纖維細(xì)胞及肌成纖維細(xì)胞存活率的影響;WesternBlot法測定肺成纖維細(xì)胞及肌成纖維細(xì)胞CTGF及α-SMA的蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1黃芩苷對肺成纖維細(xì)胞及肌成纖維細(xì)胞存活率的影響
　　 肺成纖維細(xì)胞是指正常培養(yǎng)的無TGF-β誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞，肌成纖維細(xì)胞為

4、肺成纖維細(xì)胞經(jīng)TGF-β誘導(dǎo)48h且α-SMA表達(dá)增加的細(xì)胞，對照組為無藥物干擾的。與對照組(0μmol/L)相比，10、20和40μmol/L的黃芩苷對肺成纖維細(xì)胞及肌成纖維細(xì)胞的存活率均無明顯影響(P＞0.05)，80、160μmol/L濃度的黃芩苷抑制肺成纖維細(xì)胞及肌成纖維細(xì)胞的存活率(P＜0.01)。提示10-40μmol/L濃度的黃芩苷對肺成纖維細(xì)胞及肌成纖維細(xì)胞無明顯毒性作用。
　　 2黃芩苷對肺成纖維細(xì)胞CTGF及

5、α-SMA蛋白表達(dá)的影響
　　 與對照組(0μmol/L)相比，10、20、40μmol/L濃度的黃芩苷對肺成纖維細(xì)胞CTGF及α-SMA蛋白表達(dá)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，80、160μmol/L濃度的黃芩苷則抑制肺成纖維細(xì)胞CTGF及α-SMA蛋白表達(dá)(P＜0.01)。這提示10-40μmol/L黃芩苷既不增加肺成纖維細(xì)胞CTGF表達(dá)也不誘導(dǎo)其向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，80-160μmol/L黃芩苷則抑制其表達(dá)。
　　

6、 3黃芩苷對肺肌成纖維細(xì)胞CTGF及α-SMA蛋白表達(dá)的影響
　　 TGF-β誘導(dǎo)后的細(xì)胞與正常肺纖維細(xì)胞相比，CTGF及α-SMA蛋白表達(dá)明顯升高，提示體外肌成纖維細(xì)胞誘導(dǎo)成功。與對照組相比(0μmol/L)，10、20、40、80、160μmol/L濃度的黃芩苷呈劑量依賴性的抑制肌成纖維細(xì)胞CTGF及α-SMA蛋白表達(dá)(P＜0.01)，提示黃芩苷呈劑量依賴性促進(jìn)肌成纖維細(xì)胞去分化為成纖維細(xì)胞。
　　 結(jié)論:
　

7、　 110-40μmol/L濃度的黃芩苷對肺成纖維細(xì)胞及肌成纖維細(xì)胞存活率無影響，80、160μmol/L濃度的黃芩苷則表現(xiàn)出毒性作用。
　　 210-40μmol/L濃度的黃芩苷既不增加肺成纖維細(xì)胞CTGF表達(dá)也不誘導(dǎo)其向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，80-160μmol/L濃度的黃芩苷抑制肺成纖維細(xì)胞CTGF及α-SMA蛋白表達(dá)。
　　 3黃芩苷呈劑量依賴性的(10、20、40、80、160μmol/L)抑制肌成纖維細(xì)胞CTG