香煙煙霧冷凝物對肺成纖維細胞向肌成纖維細胞分化的影響.pdf

1、目的:
　　香煙煙霧中含有許多有害的化學物質，是多種疾病的重要誘發(fā)因素之一，被公認為是引起肺間質疾病的主要危險因素。香煙煙霧相關肺間質性疾病的分子機制尚不清楚，臨床上肺間質纖維化也缺乏有效的治療方法。近年來關于香煙煙霧對肺成纖維細胞分化和增殖的影響機制受到人們的關注。本實驗中使用的WI-38細胞為體外培養(yǎng)的人胚肺二倍體成纖維細胞，用不同濃度的香煙煙霧冷凝物(Cigarette smoke condensate,CSC)分別對轉化生

2、長因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）誘導下的成纖維細胞進行干預，通過檢測細胞α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA)的含量及吸光度值來反映CSC對肺成纖維細胞向肌成纖維細胞分化進程及增殖的影響,目的在于探討香煙煙霧參與肺間質相關疾病的可能機制。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)人胚肺成纖維細胞來源的WI-38細胞，取對數(shù)生長期的細胞進行實驗。香煙煙

3、霧冷凝物的制備是參考Carp and Janoff[1]最早使用的某種特殊裝置來實現(xiàn)的。通過這個裝置完成兩支香煙的抽吸，待煙霧在培養(yǎng)基中溶解，調整合適的酸堿度，除去多余的大顆粒和細菌，根據(jù)實驗分組用培養(yǎng)基稀釋至若干濃度組，原則上用于實驗的時間應控制在30min內。本實驗首先嘗試應用0％、2.5%、5%、7.5%、10%、12.5%濃度的香煙冷凝物培對培養(yǎng)的細胞進行干預，每組均加入等量5μg·L-1的TGF-β1。通過顯微鏡觀察細胞形態(tài)，

4、ELISA法檢測細胞中α-SMA的水平。依據(jù)其結果選定合適的濃度進行實驗分組,實驗分為空白對照組、5%CSC組、7.5%CSC組、10%CSC組.采用MTT法測定細胞活力。
　　結果：
　　1、顯微鏡下觀察WI-38細胞在不同濃度CSC干預下形態(tài)學變化：顯微鏡下觀察結果為：空白組的成纖維細胞胞體較大，細胞形態(tài)呈紡錘型或星型；而試驗組細胞則表現(xiàn)為扁平狀纖維結構。
　　2、不同濃度CSC對WI-38細胞在TGF-β1誘導下

5、向肌成纖維細胞分化的影響：通過ELISA法檢測，與對照組相比，2.5%CSC組和12.5%CSC組α-SMA含量無顯著增高，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）,中間濃度CSC組α-SMA含量顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義，且CSC濃度越高α-SMA含量越高，呈濃度依賴性，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）3、不同濃度CSC對WI-38細胞增殖的影響：通過MTT比色法檢測，CSC對體外培養(yǎng)的WI-38細胞增殖的抑制作用較強，這種作用表現(xiàn)出一

6、定的劑量和時間依賴性。相同濃度香煙煙霧冷凝物不同時間（1-7d）作用后，隨作用時間延長其抑制率增大，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。相同時間不同濃度（0% CSC、5%CSC、7.5%CSC、10%CSC）作用后，隨濃度增高其抑制率增大，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結論:
　　1、香煙煙霧冷凝物可抑制肺成纖維細胞的增殖；
　　2、濃度為7.5%的香煙煙霧冷凝物可能是促進肺成纖維細胞向肌成纖維細胞的分化的最