miR-21調(diào)控大鼠BMSCs向肌成纖維細胞分化的機制研究.pdf

1、研究報導放療誘導的纖維萎縮機制在放射性頜骨壞死中起重要作用，但具體的調(diào)控機制尚不明確。通過多種纖維化疾病研究的文獻發(fā)現(xiàn)miR-21與TGF-β1在纖維化過程中參與調(diào)控作用，因此本實驗通過研究大鼠骨髓間充質(zhì)細胞向肌成纖維細胞分化的過程，探討 miR-21是否調(diào)控了TGF-β1對大鼠骨髓間充質(zhì)細胞向肌成纖維細胞的誘導分化過程。此研究有望深入闡述放射性頜骨壞死中頜骨纖維萎縮機制的具體調(diào)控機制，為進一步治療和預防提供新靶點。
　　目的：檢

2、測TGF-β1誘導大鼠BMSCs成纖維細胞和肌成纖維細胞分化過程中miR-21的基因表達，同時探討miR-21在體外大鼠BMSCs成纖維細胞分化過程中的調(diào)控作用。為治療頜骨纖維化提供了一個新的靶點。
　　方法：1.原代獲得大鼠骨髓間充質(zhì)細胞，并進行分離純化培養(yǎng)。并用一定濃度的TGF-β1對大鼠骨髓間充質(zhì)細胞向肌成纖維細胞進行誘導分化。2. Real-time PCR檢測大鼠骨髓間充質(zhì)細胞向肌成纖維細胞誘導過程中miR-21基因表達

3、水平差異。3.利用miR-21基因模擬物mimics和inhibitor對大鼠骨髓間充質(zhì)細胞進行轉(zhuǎn)染，使其過表達或者下調(diào)，Real-time PCR和Western blot檢測肌成纖維細胞的相關基因和蛋白α-SMA的表達，觀察 miR-21對大鼠骨髓間充質(zhì)細胞的生物學影響。3. miR-21基因的mimics模擬物轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)細胞后，加入一定濃度的TGF-β1，Western blot和免疫細胞化學法檢測肌成纖維細胞的相關蛋白α

4、-SMA的表達，從而明確miR-21對大鼠骨髓間充質(zhì)細胞向肌成纖維細胞的調(diào)控作用是否與TGF-β1通路相關。
　　結果：本實驗發(fā)現(xiàn)一定濃度的TGF-β1可以誘導大鼠骨髓間充質(zhì)細胞向肌成纖維細胞分化，在此過程中miR-21基因的表達上調(diào)，并且具有時間依賴性和劑量依賴性。一定濃度的TGF-β1處理后miR-21表達升高且在處理后的48h表達量達到最高峰值。當TGF-β1的濃度為5ng/ml時，miR-21的表達最高。人工合成的miR-

5、21 mimics轉(zhuǎn)染至大鼠BMSCs后能夠有效提高miR-21表達量從而促進了細胞α-SMA基因和蛋白的表達，而人工合成的miR-21 inhibitor轉(zhuǎn)染后能夠有效下調(diào)miR-21表達量從而降低了細胞α-SMA基因和蛋白的表達；miR-21 mimics增加了TGF-β1刺激大鼠BMSCs向肌成纖維細胞分化的作用，表明miR-21為促纖維化的基因。
　　結論：本研究發(fā)現(xiàn)，miR-21能夠正調(diào)控TGF-β1誘導的大鼠骨髓間充質(zhì)