幾種中藥對皮膚成纖維細胞的影響.pdf

1、目的： 體外培養(yǎng)正常成人皮膚成纖維細胞，并對成纖維細胞進行鑒定，觀察川芎嗪，苦參堿，積雪草甙對正常成人皮膚成纖維細胞增殖的影響以及對其自分泌轉(zhuǎn)化生長因子β1的影響。 方法： 1取正常成人包皮，用組織培養(yǎng)法進行成纖維細胞原代培養(yǎng)。 2鑒定成纖維細胞： (1)形態(tài)學觀察：將成纖維細胞用0.25％胰酶消化，制成單細胞懸液，細胞爬片，乙醇固定，鏡下觀察細胞的形態(tài)特征。 (2)免疫組織化學鑒定：取上

2、述細胞爬片，免疫組織化學測定細胞波形蛋白和角蛋白表達的情況。 3以不加藥的含10％的胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液為對照組，設(shè)苦參堿，川芎嗪，積雪草甙3個加藥組，各設(shè)5個不同的濃度，加入培養(yǎng)的皮膚成纖維細胞中進行培養(yǎng)，于24小時，48小時后在倒相差顯微鏡下攝像，并且作MTT，在酶標儀上進行檢測OD值。 4同上分組，培養(yǎng)24小時后分別取細胞上清液用ELISA方法測定細胞上清液中TGF—β1的含量。 5乳酸脫氫酶(LDH)

3、活性測定，同上分組，取上述細胞上清液，用自動生化分析儀測定，測定對照組LDH的含量。 6統(tǒng)計所有數(shù)據(jù)均以x±s表示，采用單因素方差分析(one—wayNAOVA)，兩兩比較用LSD檢驗，應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件處理。檢驗水準P＜0．05為差異有顯著性。 結(jié)果： 1人成纖維細胞形態(tài)學觀察及鑒定：HE染色后光鏡觀察顯示細胞為多角形或長梭形。波形蛋白免疫細胞化學染色顯示成纖維細胞胞漿染成深棕色，為陽性。 2

4、成纖維細胞形態(tài)學變化對照組鏡下可見外形狹長、胞核呈梭形、走向趨于一致的細胞，多呈平行排列并有一定弧度。細胞中央有圓形或卵圓形核，部分細胞可見向外伸出2-3個長短不一的突起，為成纖維細胞。隨著培養(yǎng)時間的增加，細胞數(shù)量增多，細胞間隙變窄，呈條索狀分布。 積雪草甙實驗組：當藥物濃度為0.25mg/ml時，24小時后細胞就變短，出現(xiàn)少許脫壁、漂浮的細胞。在這個時間段內(nèi)，隨著培養(yǎng)濃度的增加，貼壁細胞數(shù)量進一步減少，細胞間隙變大，培養(yǎng)液中成

5、形的細胞少見。當藥物濃度達到2.5mg/ml時細胞即變圓，大量細胞漂浮于培養(yǎng)液中?？鄥A實驗組：當藥物濃度為0.5mg/ml時，在24小時個時間段內(nèi)，隨著培養(yǎng)濃濃度的增加，細胞數(shù)量減少，細胞梭狀突起回縮，與鄰近細胞接觸減少，細胞間隙變大，形態(tài)逐漸變圓、脫壁。當藥物濃度達到5mg/ml時，48小時后細胞變圓，大量細胞漂浮于培養(yǎng)液中。 川芎嗪實驗組：在24小時時間段內(nèi)，當藥物濃度為0.5mg/ml時，隨著培養(yǎng)濃濃度的增加，細胞數(shù)量減

6、少，細胞梭狀突起回縮，與鄰近細胞接觸減少，細胞間隙變大，形態(tài)逐漸變圓、脫壁。當藥物濃度達到5mg/ml時，24小時后細胞即變圓，大量細胞漂浮于培養(yǎng)液中。 3各組中藥培養(yǎng)24小時后，取細胞上清液，用Elisa方法測定細胞上清液中TGF—β1的含量．各組中TGF—β1的OD值均很低，與對照組經(jīng)統(tǒng)計學處理無顯著性差異(P＞0.05)4一定濃度下的積雪草甙，苦參堿，川芎嗪對成纖維細胞LDH活性的無影響。 結(jié)論： 在一定濃