酸性成纖維細胞生長因子(aFGF)對瘢痕疙瘩和正常皮膚成纖維細胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型膠原分泌影響的研究.pdf

1、目的：探討酸性成纖維細胞生長因子(aFGF)對體外培養(yǎng)的瘢痕疙瘩和正常皮膚成纖維細胞(KeloidfibroblastKFB、NormalskinfibroblastNFB)的增殖及Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白合成的調(diào)控作用。
　　 方法：選取15例瘢痕疙瘩組織，10例正常皮膚組織，采用組織塊法培養(yǎng)瘢痕疙瘩成纖維細胞，兩步酶消化法培養(yǎng)正常皮膚成纖維細胞，以瘢痕疙瘩成纖維細胞為實驗組，以正常皮膚成纖維細胞為對照組，進行以下研究:(1)采用倒置

2、顯微鏡觀察成纖維細胞形態(tài)，透射電鏡觀察成纖維細胞的超微結(jié)構(gòu);(2)采用四甲基偶氮唑鹽比色法（MTT法）連續(xù)7天檢測不同濃度aFGF作用下成纖維細胞的增殖情況，并繪制生長曲線，計算其最佳作用時間;(3)采用免疫組化法檢測成纖維細胞增殖細胞核抗原(ProliferatingCellNuclearAntigen，PCNA)的表達情況;(4)通過實時熒光定量PCR測定成纖維細胞Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白mRNA的表達量;(5)通過Westernblot法

3、測定細胞中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的表達量;(6)通過檢測培養(yǎng)基中膠原蛋白的含量來檢測細胞外膠原的分泌量。
　　 結(jié)果：瘢痕疙瘩組織及正常皮膚組織，均成功培養(yǎng)出成纖維細胞。(1)成纖維細胞形態(tài)學比較:瘢痕疙瘩與正常皮膚成纖維細胞均呈長梭形、不規(guī)則形，胞質(zhì)飽滿，胞核淡然，呈橢圓形，可見1-2個核仁，生長旺盛;電鏡下，瘢痕疙瘩成纖維細胞中有大量的Ⅰ型膠原，高爾基體、核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器豐富，胞膜表面有細絲狀結(jié)構(gòu)，胞外有大量膠原分泌。(2)

4、aFGF對瘢痕疙瘩和正常皮膚成纖維細胞增殖的影響:培養(yǎng)基中加入不同濃度(0、1、10、50、100、500ng/ml)的aFGF培養(yǎng)成纖維細胞7d，可見隨著aFGF濃度的增加，細胞增殖速度明顯增加，實驗組與對照組相比細胞增殖速度較快，細胞增殖率在藥物作用第4天后差異顯著(p＜0.05);免疫組化染色顯示PCNA在藥物作用第4天后實驗組比對照組增殖明顯加快(p＜0.05)。(3)實時熒光定量PCR及Westernblot法測定成纖維細胞Ⅰ

5、、Ⅲ型膠原蛋白mRNA和蛋白表達情況，結(jié)果為aFGF低濃度組(1、10ng/ml)對瘢痕疙瘩培養(yǎng)成纖維細胞Ⅰ型膠原的表達具有促進作用(p＜0.05)，對Ⅲ型膠原蛋白的表達無顯著作用，高濃度組(100、500ng/ml)對瘢痕疙瘩成纖維細胞Ⅰ、Ⅲ型膠原的表達具有顯著抑制作用(p＜0.05);對正常皮膚成纖維細胞作用表現(xiàn)為，低濃度時對Ⅰ、Ⅲ型膠原的表達無顯著的影響，在高濃度時對Ⅰ型膠原表達具有顯著的抑制作用(p＜0.05)。(4)檢測培養(yǎng)基