成纖維細胞生長因子受體阻滯劑對膀胱腫瘤細胞增殖和遷移的影響及機制研究.pdf

1、第一部分 FGFR抑制劑通過MAPK信號通路對T24細胞增殖和遷移的影響
　　目的:我國最常見的泌尿系統(tǒng)腫瘤是膀胱癌，在全部惡性腫瘤中約占3.2％，膀胱癌以尿路上皮細胞腫瘤為主，約占95％。膀胱癌會直接威脅患者生存。目前對于膀胱癌的藥物治療有很多，但是仍有一些不足。FGFR在膀胱上皮細胞中廣泛存在，有研究表明其可能參與腫瘤細胞的生長。因此本研究旨在觀察抑制FGFR是否可以有效抑制T24細胞的增殖和遷移，及其可能的信號通路。

2、　　方法:分別用不同濃度0、60、70、80μmol/LFGF受體抑制劑(sprouty)處理體外培養(yǎng)的膀胱癌T24細胞后，首先觀察細胞數(shù)量、形態(tài)變化;遷移觀察sprouty對膀胱癌細胞遷移能力的影響情況;膀胱癌T24細胞增殖的變化通過MTT比色法檢測;通過Western blot檢測sprouty作用后膀胱癌T24細胞ERK, P38，JNK磷酸化水平以及總蛋白表達情況;統(tǒng)計學方法:本研究采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學處理。

3、用采用t檢驗對計量資料，x2檢驗對計數(shù)資料進行統(tǒng)計學分析，以p＜0.05為差異有顯著意義。
　　結果:FGFR抑制劑（Sprouty）能明顯抑制T24細胞增殖，細胞發(fā)生明顯的皺縮，凋亡。MTT結果顯示FGFR抑制劑處理膀胱癌細胞，細胞增殖具有劑量和時間依賴性，即隨藥物濃度升高(0-80μmol/L)和作用時間的延長(24-72h)而抑制作用增強。遷移觀察sprouty對膀胱癌細胞遷移能力的影響，結果顯示sprouty0、60、70

4、、80μmol可以明顯抑制細胞的遷移，并且隨著作用濃度的增加而增加。進一步檢查sprouty作用可能的信號通路，westernblot的結果顯示，sprouty可以明顯抑制ERK磷酸化水平，增加JNK磷酸化水平，而對于P38并無明顯影響。
　　結論:FGFR抑制劑可能通過MAPK信號通路抑制T24細胞增殖和遷移。
　　第二部分 FGFR抑制劑對于膀胱腫瘤生長以及侵襲的影響
　　目的:腫瘤的形成是異型細胞過度增殖，轉移。

5、腫瘤細胞首先發(fā)生局部浸潤，進而轉移到其他組織，增加其侵襲性以及惡性程度，最終導致患者死亡。腫瘤細胞的局部浸潤首先是腫瘤細胞之間的連接減弱，粘附力降低，腫瘤細胞與基底膜粘附降低，細胞外基質(zhì)發(fā)生降解，由此腫瘤細胞通過降解空隙發(fā)生遷移。在第一部分已經(jīng)證實了FGFR可以通過MAPK信號通路抑制T24細胞的增殖和遷移，在本節(jié)內(nèi)容中進一步探討FGFR抑制劑是否可以對于膀胱癌腫瘤生長以及侵襲產(chǎn)生相應的作用。
　　方法:選取BALB/C nu/n

6、u裸鼠，共40只，4～6周齡，體重20g左右，恒溫恒濕飼養(yǎng)，自由進食水。裸鼠在動物房適應3天后，即進行腫瘤細胞的局部注射。準備腫瘤細胞:取對數(shù)生長期的T-24細胞，調(diào)整活細胞濃度為5×106/ml，于每只裸鼠腹股溝皮下接種上述單細胞懸液0.2ml后，將裸鼠隨機分為四組，每組10只，分別為對照組、bFGF組，sprouty組以及sprouty+bFGF共同作用組。并在第二天開始給藥，腹腔注射1次/d，對照組注射等量生理鹽水。培養(yǎng)T24細胞

7、分別給予，與上述分組相同，給藥12h后，觀察MMPs的變化，并提取在體腫瘤細胞RNA，進一步觀察MMPs mRNA水平的改變。
　　結果:bFGF具有明顯的成瘤性，而FGFR抑制劑sprouty可以抑制腫瘤的生成，并且可以逆轉bFGF對腫瘤生成的促進作用。bFGF可能通過調(diào)節(jié)MMPs的表達從而影響腫瘤細胞的侵襲，F(xiàn)GFR抑制劑sprotuy能抑制MMPs的表達，并且可以阻斷bFGF對MMPs表達的調(diào)控作用。
　　結論:FGF