法尼酯X受體對(duì)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21表達(dá)的影響及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、研究背景：肥胖日益成為危害人體健康的重要因素，常伴有高膽固醇、高血壓、高血脂及糖尿病等。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21(Fibroblast growth factor 21，F(xiàn)GF21)是新發(fā)現(xiàn)的代謝調(diào)控因子，大量實(shí)驗(yàn)研究證明，F(xiàn)GF21在糖脂代謝方面有著重要的調(diào)節(jié)功能，可以抵抗飲食誘導(dǎo)的肥胖,使肥胖動(dòng)物體重顯著降低。作為核受體超家族成員之一，法尼酯X 受體(Farnesoid X receptor,FXR)，可以通過(guò)調(diào)節(jié)諸多靶基因的表達(dá)而在

2、調(diào)節(jié)糖代謝、脂代謝和膽固醇代謝中發(fā)揮著極其重要的作用，但FXR對(duì)FGF21表達(dá)的影響還未見(jiàn)報(bào)道。兩者都高表達(dá)于肝臟，并在糖脂代謝中均發(fā)揮重要作用，我們推測(cè)FGF21是否也是FXR的一個(gè)靶基因呢？這將為了解FXR和FGF21的生物學(xué)功能及其機(jī)制，及防治肥胖提供重要的科學(xué)依據(jù)，并為之提供新的潛在治療靶點(diǎn)。
　　 研究目的：探討FXR 活化后是否能夠調(diào)控FGF21的表達(dá)，并對(duì)其調(diào)控機(jī)制進(jìn)行初步研究。
　　 研究方法：1.本實(shí)驗(yàn)

3、中分別給予為人肝癌細(xì)胞株HepG2和人胎肝細(xì)胞株L02 FXR不同濃度激動(dòng)劑CDCA 或GW4064 處理24小時(shí)候，采用逆轉(zhuǎn)錄-PCR(RT-PCR)法、Realtime PCR 法和Western Blot 法分別檢測(cè)FGF21mRNA和蛋白表達(dá)變化情況；2.在線預(yù)測(cè)FXR在FGF21基因啟動(dòng)子5’側(cè)翼啟動(dòng)子區(qū)可能的結(jié)合位點(diǎn)，ER10分值最高，是FXR 結(jié)合位點(diǎn)的可能性最大；提取HepG2細(xì)胞基因組DNA，并采用PCR 法擴(kuò)增包含E

4、R10位點(diǎn)的FGF21基因啟動(dòng)子區(qū)，構(gòu)建熒光素酶報(bào)告基因重組質(zhì)粒pGL3(-1790/+111),同時(shí)構(gòu)建不包含ER10位點(diǎn)的pGL3(-768/+111),利用脂質(zhì)體，將活性FXR表達(dá)質(zhì)粒Vp-FXR分別與兩個(gè)重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)然到HepG2細(xì)胞中，24小時(shí)后檢測(cè)各組報(bào)告基因的表達(dá)活性。3.隨機(jī)將18只C57BL/6小鼠分為3組，根據(jù)小鼠的體重分別給予3組小鼠不同量的CDCA(0.1％DMSO，10mg/kg,50mg/kg)處理7天后處死

5、，取其肝臟，采用RT-PCR 法和Western-blot 法分別檢測(cè)小鼠肝臟中FGF21mRNA和蛋白的表達(dá)情況。
　　 研究結(jié)果：1.FXR 活化后可顯著上調(diào)兩種肝細(xì)胞中FGF21mRNA和蛋白表達(dá)水平，并呈劑量依賴(lài)型；2. 將熒光素酶報(bào)告基因重組載體pGL3(-1790/+111)和pGL3(-768/+111)分別與vp-FXR 共轉(zhuǎn)染入HepG2細(xì)胞后，pGL3(-1790/+111)活性被顯著上調(diào)，而pGL3(-76

6、8/+111)活性無(wú)明顯變化。3.CDCA 可以顯著上調(diào)C57BL/6小鼠肝臟中FGF21分子mRNA和蛋白的表達(dá)并呈劑量依賴(lài)型。
　　 研究結(jié)論：以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，F(xiàn)XR 活化后可在培養(yǎng)肝細(xì)胞和小鼠體內(nèi)上調(diào)FGF21的表達(dá)，而FXR上調(diào)FGF21表達(dá)的分子機(jī)制可能是通過(guò)結(jié)合FGF21基因啟動(dòng)子上ER10序列來(lái)實(shí)現(xiàn)的，ER10可能是FXR的結(jié)合位點(diǎn)，而FXR對(duì)FGF21調(diào)控的具體機(jī)制還需進(jìn)一步闡明。以上研究為闡明FXR和FGF2