重組人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)創(chuàng)傷愈合的影響.pdf

1、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fibroblast growth factor,FGF)在人體內(nèi)分布廣泛,主要包括堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)兩大類。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子已應(yīng)用于臨床,促進(jìn)組織損傷及傷口修復(fù)。而酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子也能誘導(dǎo)傷口附近的組織細(xì)胞如血管平滑肌細(xì)胞、成纖

2、維細(xì)胞、肌纖維母細(xì)胞的分裂、增殖,加速膠原纖維的合成,促進(jìn)皮膚和黏膜創(chuàng)面的愈合。正常情況下,人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(haFGF)含量很低,有學(xué)者利用基因工程技術(shù),將haFGF基因重組進(jìn)大腸埃希菌質(zhì)粒中,獲得了高效表達(dá)生物活性產(chǎn)物的工程菌株,其化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和生物活性與人體內(nèi)haFGF完全一致。在本實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用現(xiàn)有重組haFGF(rhaFGF)產(chǎn)品進(jìn)行有關(guān)動(dòng)物創(chuàng)傷愈合的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn),以期為該藥的進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。
　　本文主

3、要從以下三個(gè)部分展開論述：
　　第一部分：rhaFGF對(duì)糖尿病大鼠慢性難愈合創(chuàng)面的影響
　　目的：觀察rhaFGF.對(duì)糖尿病大鼠慢性難愈合創(chuàng)面的影響。
　　方法：建立糖尿病大鼠慢性難愈合創(chuàng)面模型,分4組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察:其中2組分別按90,60AU/cm2的劑量給予rhaFGF,陽(yáng)性對(duì)照組按60AU/cm2的劑量給予rb-bFGF,陰性對(duì)照組給予等量基質(zhì),采用創(chuàng)面照相和透明膜描記法記錄傷后第4,8,14天創(chuàng)面面積;對(duì)創(chuàng)面面

4、積的組間差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。在傷后第8天和第14天,取創(chuàng)面組織,經(jīng)10％甲醛溶液固定后制片,常規(guī)HE染色,觀察創(chuàng)面肉芽組織生長(zhǎng)與再上皮化變化,評(píng)價(jià)修復(fù)效果。
　　結(jié)果：各組大鼠創(chuàng)面面積隨傷后時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸縮小,其中rhaFGF高劑量組(90AU/cm2)和rb-bFGF治療組(60AU/cm2)大鼠的療效更顯著。組織學(xué)檢查,可見經(jīng) rhaFGF高劑量組(90AU/cm2)和 rb-bFGF治療組(60AU/cm2)治療8天后大鼠的

5、創(chuàng)面成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)活躍,數(shù)量多,毛細(xì)血管胚芽與成纖維細(xì)胞數(shù)量顯著多于陰性對(duì)照組和 rhaFGF治療量組(60AU/cm2)。傷后第14天,rhaFGF高劑量組(90AU/cm2)和rb-bFGF治療組(60AU/cm2)的大鼠創(chuàng)面病理切片顯示再上皮化明顯,治療效果明顯優(yōu)于陰性對(duì)照組和 rhaFGF治療量組(60AU/cm2)。
　　結(jié)論：rhaFGF.對(duì)糖尿病大鼠慢性難愈合創(chuàng)面有促修復(fù)作用,可促進(jìn)創(chuàng)面肉芽組織生長(zhǎng)、毛細(xì)血管胚芽形成

6、與再上皮化。
　　第二部分：rhaFGF對(duì)糖尿病大鼠慢性難愈合創(chuàng)面的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)的影響.
　　目的：觀察rhaFGF對(duì)糖尿病大鼠慢性難愈合創(chuàng)面的TGF-β1和VEGF表達(dá)的影響,深入探討rhaFGF在組織修復(fù)中的作用機(jī)制。
　　方法：首先建立糖尿病大鼠慢性難愈合創(chuàng)面模型,分四組進(jìn)行觀察,其中2組分別按90,60AU/cm2的劑量給予rhaFGF,陽(yáng)性對(duì)照組按60A

7、U/cm2的劑量給予rb-bFGF,陰性對(duì)照組給予等量基質(zhì)。在傷后第8天和第14天,取創(chuàng)面組織,經(jīng)10%甲醛溶液固定后制片,采用免疫組化方法檢測(cè)各組傷后不同時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面愈合組織中TGF-β1與VEGF的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：創(chuàng)面組織中TGF-β1的表達(dá)量逐漸增加,其中以rhaFGF高劑量組(90AU/cm2)和rb-bFGF治療組(60AU/cm2)更為明顯。創(chuàng)面組織中VEGF的表達(dá)量逐漸減少,但是rhaFGF高劑量組(90AU/c

8、m2)和rb-bFGF治療組(60AU/cm2)陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)個(gè)數(shù)仍然顯著多于陰性對(duì)照組和rhaFGF治療量組(60AU/cm2)。
　　結(jié)論：rhaFGF可能通過(guò)上調(diào)糖尿病大鼠創(chuàng)面中TGF-β1和VEGF的表達(dá),從而促進(jìn)肉芽組織生長(zhǎng)和毛細(xì)血管胚芽形成使得愈合周期顯著縮短。
　　第三部分：rhaFGF對(duì)創(chuàng)面愈合后期的影響
　　目的：觀察rhaFGF對(duì)創(chuàng)面愈合后期的影響,深入探討rhaFGF在組織修復(fù)后期中的作用機(jī)制。<

9、br>　　方法：利用大鼠創(chuàng)面模型,采用免疫組化方法檢測(cè)傷后不同時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面愈合組織中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表達(dá)情況;采用羥脯氨酸測(cè)試法檢測(cè)傷口中膠原纖維的含量,并對(duì)照觀察創(chuàng)面應(yīng)用rhaFGF后以上各項(xiàng)指標(biāo)的變化。
　　結(jié)果：創(chuàng)面組織中caspase-3的表達(dá)量逐漸增加,外用rhaFGF后第14天和21天的caspase-3表達(dá)量顯著高于單純創(chuàng)傷組。傷口中羥脯氨酸的含量逐漸增加,外用rhaFGF后第8天和1