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1、廣西師范大學碩士學位論文重組人成纖維細胞生長因子8a(rhFGF8a)在大腸桿菌中的表達優(yōu)化姓名:付燦申請學位級別:碩士專業(yè):生態(tài)學指導教師:黃明20060501IIAbstractAmemberoftheFibroblastGrowthFactfamilyFibroblastGrowthFact8isofma(FGF8a)isacceptedasacrucialganizingsignalduringthedevelopmentofv
2、ertebrateembryos.FurthermetheFGF8aperfmsmanyotherbiologicalfunctionssuchashealingtissuewoundculturingtheneuralstemcellsinducingittodopaminergicneurons.SoitissuggestedthatthepotentialapplicationishugefFGF8atobenefitthecli
3、nicaltreatment.InpresentstudyithasprovedthatthesolubleexpressionbenefitstoenhancefinalproductyieldbioactivityofrhFGF8aproteincomparingwiththeinclusionbodyexpression.Onthebasisofinducinginclusionbodyexpresstionbacterialst
4、rainrhFGF8apET22b()Rosetta(DE3)toexpresssolublerhFGF8awhichhadbeenbuiltinfmerresearchtheoptimumconditionofsolubleexpressionwasobtainedbyhavingparticularlystudiedseveralinfluencingfactsofsolubleexpressionsuchasinducedtemp
5、eratureconcentrationofIPTGinducedtimeinducedperiodcomponentsofculturemedium.ThedatasuggestedthatthecontentofthesolubleexpressedrhFGF8aproteinwasoptimizedtomethan30%ofthetotalbacterialproteins.Usingthetechniqueofchromatog
6、raphyrhFGF8aproteinwasisolatedpurifiedsuccessfully.TheresultofSDSPAGE(SodiumDodecySulfatePolyacrylaeGelElectrophesis)showedthatthepurityofrhFGF8aproteinwasabove90%.MTT(3(45dimethylthiazol2yl)25diphenyltetrazoliumbroe)ass
7、ayrevealedthattheactivityofthepurifiedproteinexpressedsolublywashigherthanthatinthefmofinclusionbodyinEscherichiacolirhFGF8apET22b()Rosetta(DE3).InsummarytheconditionofsolubleexpressionthepurificationmethodofrhFGF8aprote
8、inwhichhavebeenestablishedinthisstudynotonlylaythefoundationfthefollowingresearchlargescaleindustrialproductionbutalsocouldapplytothestudyofothersimilarmembersofFibroblastGrowthFacts.KeyWds:rhFGF8asolubleexpressionoptimi
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