酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)人臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】
　　 觀察酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（acid fibroblast growth factor,aFGF）對(duì)體外培養(yǎng)人臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞(endotheliAlprogenitor cells,EPCs)生物學(xué)功能及凋亡的響，進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。旨在為體外擴(kuò)增EPCs尋找可能的誘導(dǎo)劑，從而獲取數(shù)量充足且功能良好的血管組織工程細(xì)胞。
　　 【方法】
　　 采用密度梯度離心法從人臍帶血獲取單個(gè)核細(xì)胞，貼壁法對(duì)細(xì)

2、胞進(jìn)行培養(yǎng)。用包含有VEGF和bFGF的M199培養(yǎng)液對(duì)貼壁細(xì)胞培養(yǎng)7d后，胰酶將貼壁細(xì)胞消化下來(lái)后供實(shí)驗(yàn)用。并通過(guò)如下方法對(duì)EPCs進(jìn)行鑒定：倒置顯微鏡下對(duì)細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀察；激光共聚焦顯微鏡對(duì)EPCs結(jié)合FITC-UEA-I和吞噬Dil-acLDL
　　 的功能進(jìn)行鑒定；免疫組化檢測(cè)Ⅷ因子表達(dá)；流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞表面抗體CD34、VEGFR2、CD133進(jìn)行測(cè)定。
　　 培養(yǎng)7d后，收集貼壁細(xì)胞并將其隨機(jī)分成4組，并分別

3、向不含有其它細(xì)胞生長(zhǎng)因子的M199培養(yǎng)液中加入aFGF 0μg/L（對(duì)照組）、2μg/L、5μg/L、10μg/L分別干預(yù)培養(yǎng)6h、12h、24h、48h，再對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。CCK-8試劑盒、改良的Boyden小室法、貼壁法及流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)aFGF對(duì)EPCs增殖、遷移、黏附功能及凋亡率的影響，24h后用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞Bcl-2 mRNA表達(dá)。對(duì)EPCs的數(shù)量及生物學(xué)功能用不同劑量aFGF干預(yù)后在不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行時(shí)效關(guān)系觀察，

4、并進(jìn)一步探討aFGF抑制EPCs凋亡的機(jī)制。
　　 【結(jié)果】
　　 密度梯度離心法獲取單個(gè)核細(xì)胞后，貼壁法可成功對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，貼壁細(xì)胞通過(guò)鑒定證實(shí)為EPCs。與對(duì)照組比較，aFGF可以顯著提高EPCs的生物學(xué)功能并抑制其凋亡（P＜0.05）；本研究5μg/L aFGF作用24h對(duì)EPCs多數(shù)生物學(xué)功能及凋亡抑制的影響最為顯著，其中黏附功能在aFGF 10μg/L作用12h后改善最為明顯（P＜0.05）；在aFGF對(duì)EP

5、Cs作用24h后，與對(duì)照組比較，不同濃度的aFGF 均可使人臍血EPCs的Bcl-2 mRNA表達(dá)效果顯著增強(qiáng)，其中5μg/L aFGF組效果最為顯著（P﹤0.05）。
　　 【結(jié)論】
　　 1．可利用密度梯度離心法從臍血內(nèi)分離的單個(gè)核細(xì)胞中培養(yǎng)出EPCs,貼壁法可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，貼壁細(xì)胞證實(shí)為EPCs。
　　 2．a(chǎn)FGF可以提高EPCs的生物學(xué)功能并抑制其凋亡。
　　 3．本研究，5μg/L aFGF