蘆薈凝膠對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞增殖及膠原合成的影響.pdf

1、目的：蘆薈凝膠(Aloe gel，AG)是蘆薈(Aloe)中重要的化學(xué)成分，其中含99％～99.5％的PH為4～5的天然水份，固體成分主要為糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸、纖維素等。蘆薈凝膠應(yīng)用十分廣泛，有報(bào)道蘆薈凝膠可以應(yīng)用于多種疾病的治療，如：關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、痤瘡、皮炎、燒傷和消化性潰瘍等。人皮膚成纖維細(xì)胞(human skin fibroblast，HSFb)是真皮主體細(xì)胞成分，大量的研究顯示人皮成纖維細(xì)胞的異常生物學(xué)改變與皮膚衰老及皺紋形成

2、有密切的關(guān)系。 本研究擬以人皮膚成纖維細(xì)胞為研究對(duì)象，施加不同濃度的蘆薈凝膠，觀察蘆薈凝膠對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖活性及膠原蛋白合成的影響。 方法：膠原酶消化法原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞，應(yīng)用單層成纖維細(xì)胞傳代培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)獲得人皮膚成纖維細(xì)胞后，將蘆薈凝膠加入到培養(yǎng)液中并作用于人皮膚成纖維細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，空白對(duì)照組僅加入培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組分別加入濃度為5％、10％、15％、20％的含蘆薈凝膠DMEM培養(yǎng)液，同時(shí)

3、實(shí)驗(yàn)設(shè)不同時(shí)相組，于蘆薈凝膠作用后24h、48h、72h后進(jìn)行檢測(cè)。具體檢測(cè)內(nèi)容： 1．光鏡觀察人皮膚成纖維細(xì)胞形態(tài)。 2．四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)成纖維細(xì)胞增殖程度。 3．應(yīng)用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化。 4．堿水解法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中羥脯氨酸含量。 5．免疫組化法檢測(cè)蘆薈凝膠對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞Ⅰ型前膠原表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1．光鏡觀察顯示5％，10％，15

4、％蘆薈凝膠作用后，與空白對(duì)照組相比，成纖維細(xì)胞無明顯改變，而20％蘆薈凝膠作用后成纖維細(xì)胞出現(xiàn)了增殖抑制現(xiàn)象。 2．MTT比色法結(jié)果顯示5％、10％、15％蘆薈凝膠均對(duì)成纖維細(xì)胞有增殖促進(jìn)作用，而20％蘆薈凝膠表現(xiàn)出成纖維細(xì)胞增殖抑制。 3．細(xì)胞周期時(shí)項(xiàng)分析結(jié)果顯示量效組經(jīng)5％、10％濃度蘆薈凝膠處理后細(xì)胞周期G0/G1期細(xì)胞百分率較對(duì)照組低(P<0.05)，S+G2/M期細(xì)胞百分率及增殖指數(shù)PI值較對(duì)照組增高(P<0.

5、05)，濃度為15％的蘆薈凝膠培養(yǎng)液處理組成纖維細(xì)胞的G0/G1期和S+G2/M期細(xì)胞百分率與對(duì)照組相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各蘆薈凝膠組之間比較濃度為10％的蘆薈凝膠培養(yǎng)液組PI值較其他蘆薈組增高(P<0.05)，S+G2/M期細(xì)胞百分率較對(duì)照組明顯增高(P<0.05)。時(shí)效組檢測(cè)結(jié)果顯示在不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)的細(xì)胞周期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4．各濃度蘆薈凝膠組在不同時(shí)間段時(shí)其成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液中羥脯氨酸

6、含量明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05)，各濃度蘆薈組之間比較得出10％蘆薈組較5％、15％蘆薈組更能增加成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液中羥脯氨酸含量(P<0.05)。各蘆薈組72h與24h的羥脯氨酸含量相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 5．經(jīng)10％濃度蘆薈凝膠處理后的成纖維細(xì)胞Ⅰ型前膠原表達(dá)較空白對(duì)照組增加(P<0.05)。 結(jié)論： 1．光鏡觀察和MTT比色法結(jié)果顯示適宜濃度的蘆薈凝膠能很好的促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖。

7、 2．通過流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期分布證實(shí)一定濃度的蘆薈凝膠作用后的人皮膚成纖維細(xì)胞的G0/G1期細(xì)胞所占百分率下降，S+G2/M期細(xì)胞所占百分率及PI值明顯增高，推測(cè)其可能作用機(jī)制是促使靜止態(tài)的G0/G1期細(xì)胞活躍而向S+G2/M期轉(zhuǎn)變，使DNA合成量增加，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖。 3．適宜濃度的蘆薈凝膠能增加培養(yǎng)液中羥脯氨酸含量且在作用后72h達(dá)最高水平，免疫組化法顯示經(jīng)蘆薈凝膠作用后人皮膚成纖維細(xì)胞Ⅰ型前膠原表達(dá)也增加。說明