硝苯地平對牙齦成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原合成的影響.pdf

1、硝苯地平(Nifedipine，NIF)屬于二氫吡啶類鈣通道阻滯劑，臨床上用于冠心病、高血壓的治療。自1984年第一例臨床報道服用NIF并發(fā)牙齦增生以來，國內(nèi)外學(xué)者普遍觀察到牙齦增生(gingival overgrowch，GO)為該藥在口腔的重要的副作用。其病理特點表現(xiàn)為纖維組織增生并伴有不同程度炎性細(xì)胞浸潤。許多學(xué)者在細(xì)胞水平和分子水平方面致力于對發(fā)病機(jī)制的研究，但目前發(fā)病機(jī)制仍不清楚。本研究通過體外原代培養(yǎng)正常的牙齦成纖維細(xì)胞(g

2、ingival fibroblast，GF)、NIF易感性和非易感性牙齦組織的成纖維細(xì)胞。通過細(xì)胞記數(shù)和噻唑藍(lán)(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT)法觀察細(xì)胞增殖情況，酶聯(lián)免疫吸附分析(enzyme-1inked immunosorbent assay,ELISA)檢測膠原表達(dá)的情況，初步探討NIF誘導(dǎo)牙齦增生的可能機(jī)理. 第一部分:牙齦成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng) 【材

3、料和方法】取阻生第三磨牙拔牙志愿者的健康牙齦組織，服用NIF導(dǎo)致牙齦增生患者的牙齦組織和服用NIF未表現(xiàn)牙齦增生患者的牙齦組織。通過組織塊法體外原代培養(yǎng)成纖維細(xì)胞，第5～8代用于后續(xù)實驗。 【結(jié)論】細(xì)胞培養(yǎng)是后續(xù)實驗的基礎(chǔ)，無菌規(guī)范的操作是原代培養(yǎng)成功率的保證。組織塊原代培養(yǎng)GF是傳統(tǒng)經(jīng)典的培養(yǎng)方法，操作中的細(xì)節(jié)需要認(rèn)真對待。 第二部分:硝苯地平對牙齦成纖維細(xì)胞膠原表和細(xì)胞增殖的影響 【材料和方法】適量NIF粉、

4、無水乙醇和DMEM配置終濃度為108μg/L、360μg/L、1200μg/L的NIF液，無水乙醇的終濃度為0.01％。實驗中使用健康GF。實驗分組，第1組：含NIF 108μg/L；第2組：含NIF 360μg/L；第3組：含NIF 1200μg/L；第4組：空白對照，僅為標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液。分別于加藥后1天、3天、5天，細(xì)胞計數(shù)觀察細(xì)胞增殖，ELISA檢測膠原表達(dá)情況。 【結(jié)論】體外研究表明1200μg/L、360μg/L濃度NIF

5、比低濃度NIF有促進(jìn)健康人GF Ⅰ型膠原表達(dá)和細(xì)胞增殖的作用，膠原表達(dá)增加和細(xì)胞增殖提高可能和藥物性牙齦增生的機(jī)制有關(guān)。 第三部分:硝苯地平性牙齦增生組織中成纖維細(xì)胞增殖和膠原分泌 【材料和方法】適量NIF粉、無水乙醇和DMEM配置終濃度為1μmol/L NIF液，無水乙醇的終濃度為0.01％。使用NIF易感性和非易感性牙齦組織的成纖維細(xì)胞。實驗中細(xì)胞分為4組，分別為：GF-1、GF-2、GF-3、GF-4，其中GF-1

6、、-2為NIF非易感性牙齦組織的成纖維細(xì)胞，GF-3、-4為NIF易感性牙齦組織中成纖維細(xì)胞。細(xì)胞接種于24孔板，于含1 μmol/L NIF的DMEM中培養(yǎng)，分別于第1、3、5天后MTT比色法檢測細(xì)胞增殖，ELISA檢測膠原表達(dá)情況。 【結(jié)論】體外實驗結(jié)果顯示NIF易感性牙齦組織和NIF非易感性牙齦組織在細(xì)胞增殖和膠原表達(dá)方面存在明顯的差異。NIF易感性牙齦組織細(xì)胞增殖明顯，同時膠原表達(dá)增加。這可能和NIF性藥物牙齦增生的機(jī)制