唑來膦酸對牙齦成纖維細胞增殖凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　雙磷酸鹽如唑來膦酸(zoledronicacid，ZA)被廣泛用于與代謝性疾病和與腫瘤相關的骨疾病的治療。然而最近雙磷酸鹽治療的病人出現一種嚴重的并發(fā)癥雙磷酸鹽相關性頜骨骨壞死(bisphosphonate-relatedosteonecrosisofthejaw，BRONJ)。BRONJ發(fā)生于口腔創(chuàng)傷后，并被證實主要是傷口愈合較差，軟組織斷裂，隨后死骨形成并暴露。目前對BRONJ沒有有效的臨床治療措施。本研究在體外培

2、養(yǎng)人牙齦成纖維細胞的基礎上，將其暴露于不同濃度(0-10μM)ZA，觀察隨濃度和時間增加出現的細胞學效應，觀察唑來膦酸對牙齦成纖維細胞增殖凋亡的影響，探討唑來膦酸導致BRONJ的發(fā)生機制，為臨床上使用唑來膦酸輔助治療腫瘤提供參考資料和理論依據。
　　方法:
　　原代培養(yǎng)人牙齦成纖維細胞(humangingivalfibroblasts，HGF)，取第3-6代用于實驗。利用不同濃度(0，0.5，1，5，10μM)ZA作用于HG

3、F，24小時后，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)；羅丹明123染色，熒光顯微鏡觀察各組熒光強度；AnnexinV/PI雙染，流式細胞儀檢測細胞凋亡率，量化分析各組凋亡細胞數目。采用四甲基偶氮唑鹽比色法(methylthiazolylterazolium，MTT)和細胞增殖度法動態(tài)監(jiān)測長期用藥對HGF增殖的影響。
　　結果:
　　1.采用組織塊原代培養(yǎng)法成功培養(yǎng)出人牙齦成纖維細胞。倒置顯微鏡下觀察可見，組織塊接種3-7天后即有細胞從其周

4、圍游出，細胞呈長梭形，并圍繞組織塊呈放射狀排列。傳代后細胞生長迅速，性狀穩(wěn)定。
　　2.ZA用藥24h后直接顯微鏡觀察發(fā)現，隨著藥物濃度的升高，細胞間間隙增寬，胞體皺縮，胞漿濃縮，且有細胞死亡脫落，凋亡細胞數目增加。羅丹明123染色，熒光顯微鏡下觀察，對照組熒光強度高于實驗組，且隨著ZA濃度的增加，熒光強度呈遞減趨勢，說明隨著ZA濃度的升高，細胞凋亡數目增加。流式細胞儀的AnnexinV/PI雙染色法發(fā)現，本研究中從1μM開始，隨

5、著ZA濃度的升高，凋亡率顯著升高(P<0.05)，0.5μM組與對照組無明顯差異。
　　3.MTT法檢測結果顯示，1-10μM用藥24h對HGF的增殖作用均較對照組有明顯差異(P<0.05)，0.5μM組與對照組相比則無明顯差異(P>0.05)。細胞增殖度法觀察用藥在0.5-10μM和7天范圍內表現為濃度-時間依賴效應，隨著濃度升高，時間延長，細胞增殖抑制更顯著，各不同濃度組之間存在統(tǒng)計學差異(P<0.05)。
　　結論:<