花生四烯酸對(duì)人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖的影響研究.pdf

1、目的：
　　觀察花生四烯酸對(duì)體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕（Hypertrophic Scar，HS）成纖維細(xì)胞（Fibroblast，F(xiàn)B）增殖的影響，并探討花生四烯酸（Arachidonic acid，AA）在抑制人HS中FB增殖的可能作用機(jī)制。
　　方法：
　?。?）HS組織取自本院燒傷科行瘢痕整形手術(shù)患者，采用改良組織塊聯(lián)合胰酶消化法培養(yǎng)FB，取第4代FB用于實(shí)驗(yàn)；（2）倒置顯微鏡下觀察含不同濃度（0μmol/L、5μ

2、mol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L）AA培養(yǎng)基培養(yǎng)一定時(shí)間FB的形態(tài)變化；（3）分別用含上述不同濃度AA的10％胎牛血清培養(yǎng)基培養(yǎng)FB24h、48h、72h后，CCK法檢測(cè)FB增殖活力；（4）制作FB爬片，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)加入上述含不同濃度AA培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí)后FB核中Ki-67蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　?。?）組織塊接種后第6d見(jiàn)細(xì)胞游出，呈單個(gè)散在長(zhǎng)梭形，第10d

3、組織塊周?chē)?xì)胞明顯增多，第15d左右組織塊周?chē)?xì)胞生長(zhǎng)密集，開(kāi)始相互融合。細(xì)胞傳代后7d左右基本長(zhǎng)滿(mǎn)瓶底，培養(yǎng)瓶瓶底細(xì)胞呈毛刷狀、漩渦狀或放射狀生長(zhǎng)，胞體呈長(zhǎng)梭形，周?chē)梢?jiàn)長(zhǎng)短不一的突起，細(xì)胞排列整齊規(guī)律（2）在一定濃度的AA作用下，F(xiàn)B的生長(zhǎng)形態(tài)出現(xiàn)明顯變化。AA濃度為5μmol/L、10μmol/L時(shí)，F(xiàn)B細(xì)胞數(shù)量增加，細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)走向未受到明顯影響；AA濃度為20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L時(shí)，F(xiàn)B的形狀開(kāi)始

4、表現(xiàn)出不規(guī)整，細(xì)胞大小不均勻，形狀改變，部分細(xì)胞呈圓鈍形，數(shù)量減少，胞核濃縮。AA濃度越高，F(xiàn)B的形態(tài)改變表現(xiàn)越明顯。（3）FB在5μmol/L、10μmol/L濃度的AA作用下，F(xiàn)B存活率未受到明顯影響（p>0.05），20-80μmol/L AA濃度范圍內(nèi)，F(xiàn)B隨著AA作用濃度或時(shí)間的增加其抑制率均逐步增加（P<0.05，且該濃度范圍內(nèi)各組間比較P<0.01）。（4）免疫細(xì)胞化學(xué)顯示AA濃度為20μmol/L、40μmol/L和80

5、μmol/L時(shí)，F(xiàn)B核中Ki-67蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞百分率均顯著低于AA濃度為0μmol/L時(shí)（P<0.05），且AA濃度越高，Ki-67蛋白陽(yáng)性細(xì)胞百分率越低（P<0.01）；AA濃度為5μmol/L、10μmol/L時(shí)，Ki-67蛋白陽(yáng)性細(xì)胞百分率低于AA濃度為0μmol/L時(shí)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　一定濃度的AA能抑制人HSFB的增殖，使處于分裂期細(xì)胞數(shù)量減少，這可能為其抑制HS形成作用機(jī)制之