低強(qiáng)度脈沖超聲對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、超聲波被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)治療和診斷領(lǐng)域，高強(qiáng)度聚焦超聲作為一種無(wú)創(chuàng)性治療手段正日益受到人們的重視。低強(qiáng)度脈沖超聲波(lowintensity pulsed ultrasound，LIPUS)具有刺激細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)合成增加的作用，已逐漸應(yīng)用于骨與軟組織創(chuàng)傷的愈合和神經(jīng)修復(fù)治療中。目前，LIPUS對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞的影響研究還較少，為了探討超聲治療皮膚疾病的應(yīng)用前景，我們研究了LIPUS對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖及膠原蛋白合成的影響，為L(zhǎng)

2、IPUS治療皮膚疾病提供理論依據(jù)。并開(kāi)展了聚焦超聲治療神經(jīng)性皮炎和慢性濕疹的臨床研究，進(jìn)行了超聲治療皮膚疾病的初步探討。 一、Ll PUS促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞增殖的適宜輻照參數(shù)篩選 用輻照參數(shù)為1 MHz、1.2 MHz、1.7 MHZ，每一頻率下四種不同聲強(qiáng)的LIPUS，同一聲強(qiáng)分別輻照0 min(假照組)、5 min、10 min、15 min、20 min和30 min體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞，輻照24 h后觀察成纖維細(xì)

3、的生長(zhǎng)增殖情況，采用MTT法測(cè)定其吸光光度值，計(jì)算其相對(duì)成活值，通過(guò)比較不同輻照參數(shù)對(duì)細(xì)胞的相對(duì)成活率的影響，篩選出促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的最適宜頻率、聲強(qiáng)和輻照時(shí)間。 結(jié)果：(1)用MTT法測(cè)定三種頻率(1 MHz、1.2 MHz、1.7 MHz)，每一頻率下四種聲強(qiáng)的LIPUS輻照成纖維細(xì)胞5 min，24 h后吸光光度值均增加，輻照成纖維細(xì)胞10 min，24 h后吸光光度值增加最高，較對(duì)照組都有顯著性差異(P<0.05)

4、。超過(guò)一定輻照時(shí)間后，吸光光度值下降，且隨著輻照時(shí)間的延長(zhǎng)，吸光光度值下降顯著。(2)比較細(xì)胞的相對(duì)成活率發(fā)現(xiàn)，頻率1 MHz、聲強(qiáng)0.1W/cm<'2>、輻照時(shí)間5 min時(shí)細(xì)胞相對(duì)成活率為1.195，10 min時(shí)達(dá)1.325，與其它輻照參數(shù)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，兩者之間比較P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。10min時(shí)的細(xì)胞相對(duì)成活率最高，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：(1)不同頻率、不

5、同聲強(qiáng)的LIPUS輻照一定時(shí)間均能促進(jìn)人真皮成纖維細(xì)胞增殖，超過(guò)一定輻照時(shí)間則會(huì)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。(2)頻率1MHz、聲強(qiáng)0.1 W/cm<'2>、輻照時(shí)間10min為促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖較為適宜的輻照參數(shù)。 二、低強(qiáng)度脈沖超聲對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞增殖及膠原蛋白合成的影響 采用最適宜聲參數(shù)——頻率1 MHz、聲強(qiáng)0.1 W/cm<'2>的LIPUS輻照體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞，分別輻照5 min，10 min及20 min，采用

6、H<'3>-胸腺嘧啶核苷摻入試驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞合成DNA的影響，H<'3>-脯胺酸摻入試驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞合成膠原蛋白的影響，并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞周期的影響。 結(jié)果：頻率1 MHz、聲強(qiáng)0.1 W/cm<'2>的LIPUS輻照成纖維細(xì)胞5 min，24 h后細(xì)胞H<'3>-胸腺嘧啶核苷H<'3>-TdR摻入量為對(duì)照組的1.27倍、H<'3>-脯胺酸摻入量為對(duì)照組的2.22倍，輻照10min，24 h后H<'3>-TdR摻入量為對(duì)

7、照組的1.55倍、H<'3>-脯胺酸摻入量為對(duì)照組的2.31倍，與對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，而輻照10 min時(shí)摻入量達(dá)最高，較5 min組有顯著性差異(P<0.05)，隨著輻照時(shí)間進(jìn)一步增加摻入量反而下降。LIPUS輻照5 min，S期細(xì)胞為(13.84±1.77)％，較對(duì)照組增加(P<0.05)；輻照10 min后S期細(xì)胞為(20.56±3.56)％，較對(duì)照組增加(P<0.05)；而輻照10 min G<,2>/M期

8、細(xì)胞(15.89±1.75)％，較對(duì)照組下降(P<0.05)。 結(jié)論：LIPUS輻照一定時(shí)間能夠促進(jìn)人皮膚成纖維細(xì)胞DNA及膠原蛋白合成增加，并可以使細(xì)胞的周期發(fā)生改變，促進(jìn)細(xì)胞從G<,2>/M期進(jìn)入S期，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖。 三．聚焦超聲治療神經(jīng)性皮炎和慢性濕疹的初步探討 采用自身對(duì)照法對(duì)聚焦超聲治療51例神經(jīng)性皮炎患者和51例慢性濕疹患者進(jìn)行了療效觀察和安全性評(píng)價(jià)。治療組采用重慶海扶技術(shù)有限公司研制生產(chǎn)的CZ

9、P型皮膚超聲治療儀進(jìn)行治療，對(duì)照組治療采用安慰劑(白凡士林)外涂，每日2次。治療后一月觀察病人的主觀癥狀、體征以及出現(xiàn)的其他不良反應(yīng)，評(píng)價(jià)超聲治療的有效性和安全性，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果：治療后1月，治療組神經(jīng)性皮炎患者和慢性濕疹患者各項(xiàng)瘙癢/體征指標(biāo)計(jì)分及總計(jì)分均有明顯下降，與對(duì)照組組間比較有顯著差異(P<0.05)。治療后1月，神經(jīng)性皮炎患者治療組的痊愈率和痊愈顯效率分別為2％和52.9％；慢性濕疹患者治療組的痊愈率和痊愈顯