雌激素對小鼠心臟成纖維細(xì)胞增殖的影響研究.pdf

1、目的：探討雌激素抑制心臟成纖維細(xì)胞（cardiac fibroblasts，CFS）增殖是否與中電導(dǎo)鈣激活鉀通道（intermediate-conductance Ca2+-activated K+channel,KCa3.1）有關(guān)。
　　方法：
　　1、新生小鼠心臟成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定：取新生雄性小鼠，經(jīng)手術(shù)取其心臟心室，酶消化差速貼壁法培養(yǎng)，特異性抗體熒光免疫法鑒別 CFS。
　　2、心臟成纖維細(xì)胞增殖模型的建立

2、：培養(yǎng)的CFS加入以下濃度的AngII：10-4、10-5、10-6、10-7、10-8mol/L分別培養(yǎng)12h、24h、48h、72h后，并以不加AngII作對照組，使用MTT法檢測CFS增殖情況。
　　3、觀察雌二醇（estradiol,E2）和KCa3.1通道特異性阻斷劑TRAM-34對小鼠 CFS增殖活性的影響：①對照組：AngII：10-6mol/L，無 E2，無TRAM-34；② AngII+E2組：先使用濃度為10-

3、6mol/L的AngII預(yù)處理30min后，分別加入10-5、10-6、10-7、10-8mol/L濃度的 E2；③AngII+TRAM-34組：先使用濃度為10-6mol/L的AngII預(yù)處理30min后，分別加入10-4、10-5、10-6、10-7mol/L濃度的TRAM-34；各組均處理24、48、72小時后，使用MTT法檢測細(xì)胞增殖情況。
　　4、普通PCR檢測KCa3.1mRNA表達(dá)情況， ELISA法檢測p38-MA

4、PK磷酸化水平：CFS預(yù)先用AngII（10-6mol/L)處理30min后備用，實(shí)驗(yàn)分組為：①正常對照組（無AngII，無E2，無TRAM-34）；②AngII組；③AngII+E2×10-5mol/L組；④AngII+TRAM-34×10-4mol/L組孵育48h，MTT檢測細(xì)胞增殖活性，普通PCR檢測細(xì)胞KCa3.1mRNA的表達(dá)，ELISA檢測細(xì)胞p38-MAPK的磷酸化水平。
　　結(jié)果：AngII可誘導(dǎo)小鼠CFS增殖，并

5、具有時間及濃度依賴性，與空白組對照，10-6、10-5、10-4mol/L濃度AngII增殖效果顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；10-5、10-4mol/L濃度增殖效果與10-6mol/L比較無顯著差異（P>0.05），故選用10-6mol/L作為增殖模型的濃度；與AngII組比較，E2和TRAM-34對小鼠CFS的增殖活性抑制作用明顯，并具有濃度及時間依賴性；10-5mol/LE2與10-4mol/LTRAM-34干預(yù)48h對C

6、FS增殖作用的影響無顯著差異（P>0.05）。與正常對照組比較，AngⅡ組可顯著提高KCa3.1mRNA表達(dá)，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與正常對照組比較，AngⅡ+E2×10-5 mol/L組和AngⅡ+TRAM-34×10-4mol/L組，均可顯著抑制KCa3.1mRNA表達(dá)，并具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；與AngⅡ組比較，AngⅡ+E2×10-5mol/L組和AngⅡ+TRAM-34×10-4mol/L組，均可顯著抑制KC

7、a3.1mRNA表達(dá)，并具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；AngⅡ+E2×10-5 mol/L組和AngⅡ+TRAM-34×10-4mol/L組比較無顯著差異（P>0.05）。正常對照組比較， AngⅡ能夠顯著提高p38-MAPK磷酸化水平，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與AngⅡ組比較，AngII+E2×10-5mol/L組能夠顯著降低p38-MAPK磷酸化水平，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01）；與AngⅡ組比較，AngII+TRAM-

8、34×10-4mol/L組對p38-MAPK磷酸化水平影響不顯著（P>0.05）；AngII+E2×10-5mol/L組與AngII+TRAM-34×10-4mol/L組間有顯著差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　結(jié)論：AngII可誘導(dǎo)小鼠CFS增殖；E2與TRAM-34均能抑制CFS增殖，10-5mol/LE2與10-4mol/LTRAM-34對CFS增殖作用的影響無顯著差異；雌激素抑制心臟成纖維細(xì)胞增殖的機(jī)制可能是降低