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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:探討人胎兒心臟成纖維細(xì)胞(HFCFS)經(jīng)不同濃度的醛固酮(ALD)干預(yù)后增殖的變化以及對(duì)細(xì)胞中Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)的影響,尋找和探討醛固酮致心肌纖維化的相關(guān)信號(hào)分子。
方法:采用膠原酶Ⅱ消化法、差速貼壁法、差速脫壁法獲取并純化HFCFS,在不同濃度醛固酮作用下,應(yīng)用CCK-8活細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞的增殖率。應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)細(xì)胞中Ⅰ型膠原前膠原A1(COL1A1)和Ⅲ型膠原前膠原A1(COL3A1)mRNA的變化
2、,應(yīng)用Westernblot檢測(cè)COL1A1、COL3A1蛋白表達(dá)的變化,人基因組表達(dá)譜芯片檢測(cè)表達(dá)差異基因。
結(jié)果: ALD可濃度依賴性促進(jìn)HFCFS增殖;在一定濃度范圍內(nèi)(10-9、10-8、10-7mol/L),ALD可明顯促進(jìn)HFCFS中COL1A1、COL3A1表達(dá),而10-6mol/L的ALD沒有明顯作用,10-5mol/L的ALD甚至起到抑制作用;芯片篩選獲得CCL2、DAAM1、POLR2A、SDC1、HS
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