苦參堿對醛固酮誘導(dǎo)大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖和膠原代謝的影響.pdf

1、目的:研究苦參堿(Matrine,Mat)對醛固酮(aldosterone,Ald)誘導(dǎo)新生大鼠心肌成纖維細(xì)胞(Cardiac Fibroblasts,CFs)增殖及膠原代謝的影響,探討其抑制心肌纖維化的機(jī)制.方法:利用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),差速貼壁法分離純化CFs,體外常規(guī)培養(yǎng).用Ald誘導(dǎo)CFs增殖,然后加處理因素.具體分組為:A組:對照組;B組:Ald(1.0×10<'-7>mol/L)組;C組:Ald+螺旋內(nèi)酯(Spi)組;D組:A

2、ld+洛沙坦(losartan)組;E組:Ald+Mat(0.125mmol/L)組:F組:Ald+Mat(0.25mmol/L)組;G組:Ald+Mat(0.5mmol/L)組.作用24小時(shí)后,使用MTT法檢測CFs增殖;考馬斯亮蘭法測定細(xì)胞總蛋白含量;流式細(xì)胞分析儀分析細(xì)胞周期;流式細(xì)胞分析儀及細(xì)胞免疫熒光染色方法測定增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá);分光光度法檢測細(xì)胞上清羥脯氨酸含量;細(xì)胞免疫熒光染色方法檢測纖維連接蛋白(Fibr

3、onectin,FN)表達(dá);SDS-PAGE膠原電泳方法檢測CFs膠原合成中Ⅰ型和Ⅲ型膠原比值;酶譜法檢測膠原酶活性:RT-PCR檢測基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的mRNA表達(dá);細(xì)胞免疫熒光染色、流式細(xì)胞分析儀、蛋白印跡檢測轉(zhuǎn)化生長因子β-1(TGFβ-1)的蛋白表達(dá);RT-PCR檢測smad7的mRNA表達(dá).結(jié)論:(1)Ald可導(dǎo)致CFs增殖,膠原和FN合成增加,膠原降解降低;其機(jī)制主要是通過核受體發(fā)揮作用的;(2)Sp