普伐他汀對新生大鼠心肌成纖維細胞增殖和膠原基因表達的影響及機制研究.pdf

1、目的：探討普伐他汀(Prav)對幼年大鼠心肌成纖維細胞增殖及膠原基因表達的影響，并探討其可能的作用機制。 方法： 1.細胞分離培養(yǎng)和鑒定：用酶消化法分離細胞，差速貼壁分離法獲得心肌成纖維細胞為材料，光鏡和免疫組化的方法鑒定細胞。 2.細胞增殖檢測：MTT比色法測定細胞增殖，RT-PCR方法測定Ⅰ、Ⅲ型膠原前體序列的含量。 3.實驗分組：根據(jù)不同的藥物及藥物不同濃度，實驗共分兩大部分，第一部分：觀察Prav

2、對心肌成纖維細胞的影響，主要分四個步驟：首先觀察Prav對基礎狀態(tài)下的心肌成纖維細胞增殖是否有影響，設不同濃度的Prav(10-6～10-4M)組和空白對照組。第二步觀察Prav對血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)刺激下心肌成纖維細胞增殖的影響，設AngⅡ組和不同濃度的Prav(10-6～10-4M)+Ang Ⅱ組。第三步：觀察Prav抑制AngⅡ刺激心肌成纖維細胞增殖的作用通路，分別用膽固醇代謝途徑的中間產物甲羥戊酸(MVA)、焦磷酸二牛龍牛兒

3、基酯(GGPP)、焦磷酸法尼酯(FPP)進行干預研究，分為Prav+AngⅡ+MVA組；Prav+AngⅡ+GGPP組；Prav+AngⅡ+FPP組。第四步，觀察氧化應激是否參與Ang Ⅱ對成纖維細胞的增殖作用，以及探討Prav抑制作用是否與抑制氧化應激有關，分為5組：空白組，AngⅡ組，過氧化氫酶組，AngⅡ+過氧化氫酶組，AngⅡ+Prav組，AngⅡ+過氧化氫酶+Prav組。第二部分，實驗分組同前，觀察Prav對基礎狀態(tài)下，Ang

4、 Ⅱ刺激下Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達的影響，以及MVA、GGPP、FPP對Prav作用的干預后和氧化應激對Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達的影響。 結果： 1.培養(yǎng)的細胞經過光鏡和免疫組化的方法鑒定證實為心肌成纖維細胞。 2.Prav對心肌成纖維細胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達的影響： ①Prav對基礎狀態(tài)下的成纖維細胞增殖無明顯影響，Pray各濃度組(10-6～10-4M)與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

5、 ②Prav呈濃度依賴性地抑制Ang Ⅱ的促增殖作用。Prav各濃度組A值明顯低于Ang Ⅱ組(P<0.01)。 ③Prav在基礎狀態(tài)下能抑制Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達，Pray各濃度組(10-6～10-4M)Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA水平均低于空白對照組(P<0.01)。 ④Prav呈濃度依賴性地抑制Ang Ⅱ刺激下的Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達。Prav各濃度組(10-6～10-4M)Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA水平減少，與AngⅡ組比

6、較有顯著性差異(P<0.01)。 ⑤MVA，GGPP可完全阻斷Prav的抑制作用，與AngⅡ組比較沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)，與Prav(10-4M)+AngⅡ組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。FPP對Prav的作用無影響，與Prav(10-4M)+AngⅡ組比較沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 ⑥過氧化氫酶能抑制AngⅡ刺激的CF增殖和Ⅰ、Ⅲ型膠原基因表達，與AngⅡ組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，抑制作用不

7、及Prav，與Prav組比較差異有統(tǒng)計學意義，過氧化氫酶與Prav合用與單用Prav組比較無統(tǒng)計學意義。 結論： 1.Prav呈濃度依賴性地抑制AngⅡ介導的心肌成纖維細胞增殖。 2.Prav呈濃度依賴性地抑制基礎狀態(tài)及Ang Ⅱ介導的CF膠原合成。 3.抑制甲羥戊酸途徑可能是Prav發(fā)揮抑制Ang Ⅱ刺激的CF增殖和膠原合成的作用機制。 4.氧化應激參與了Ang Ⅱ刺激的CF增殖和膠原合成的作用