CVB3對大鼠心肌成纖維細胞增殖及骨橋蛋白表達的影響.pdf

1、目的：觀察柯薩奇B3病毒(Coxsackie virus B3，CVB3)對大鼠心肌成纖維細胞增殖和骨橋蛋白(osteopontin，OPN)表達的影響，探討OPN在病毒性心肌炎的可能作用機制。 方法：取出生3～7天的SD大鼠心臟，改良法原代培養(yǎng)心肌成纖維細胞，利用細胞形態(tài)及細胞免疫化學(xué)染色對細胞進行鑒定；分別用不同滴度的CVB3感染心肌成纖維細胞，采用MTT法檢測其OD值，用RT-PCR和Western-Blot檢測OPN m

2、RNA和蛋白的表達。 結(jié)果： 1.用胰酶與膠原酶合用消化分離心肌成纖維細胞，可提高心肌成纖維細胞的存活率，心肌成纖維細胞抗波形蛋白(vimentin)染色陽性，抗α-橫紋肌肌動蛋白(α-sarcomeric actin)染色陰性。 2.用MOI分別為0、0.2PFU/cell、0.5PFU/cell、1.OPFU/ceIl的CVB3感染心肌成纖維細胞，MTT測得其OD值分別為0.35±0.05、0.37±0.04

3、、0.66±0.07、0.32±0.07，MOI為0.5PFU/cell組OD值高于對照組、0.2PFU/cell組及1.0 PFU/cell組，差異有顯著性(P<0.05)。 3.用MOI為0.5PFU/cell的CVB3感染心肌成纖維細胞，用MTT測得對照組12h、病毒組12h、1d、2d、3d的OD值分別為0.36±0.06、0.47±0.06、0.56±0.04、0.72±0.04、0.64±0.02，病毒感染12 h其

4、OD值即增高，第2d達高峰，于第3d開始有下降趨勢，各組比較差異均有顯著性(P<0.05)。 4.用RT-PCR測得心肌成纖維細胞對照組12h、1d、2d、3dOPN/β-actin光密度比值分別為0.38±0.06、0.35±0.02、0.41±0.07、0.30±0.06，各組比較差異無顯著性(P>0.05)：病毒組12h、1d、2d、3d OPN/β-actin光密度比值分別為0.56±0.06、0.72±0.05、0.9

5、8±0.06、0.86±0.02，病毒感染12h其光密度值即增高，第2d達高峰，于第3d開始有下降趨勢，各組比較差異均有顯著性(P<0.05)。 5.用Western-Blot測得心肌成纖維細胞對照組12h、病毒組12h、1d、2d、3d OPN/β-actin灰度值分別為0.26±0.04、0.36±0.03、0.52±0.06、0.76±0.06、0.62±0.03，病毒感染12h其灰度值即增高，第2d達高峰，于第3d開始有

6、下降趨勢，各組比較差異均有顯著性(P<0.05)。 6.將RT-PCR OPN/β-actin光密度值及Western-Blot OPN/β-actin與MTT(OD)值進行相關(guān)分析，Pearson相關(guān)系數(shù)分別為r=0.95 1，P=0.000及r=0.954，P=0.000，二者呈正相關(guān)關(guān)系。 結(jié)論： 1.一定滴度的CVB3可誘導(dǎo)心肌成纖維細胞增殖。 2.CVB3可使心肌成纖維細胞增殖及OPN表達增加，在一定時