大鼠心肌細胞和成纖維細胞乳酸閾及單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白表達情況的研究.pdf

1、目的：通過建立乳酸孵育模型觀察原代心肌細胞和成纖維細胞的細胞活力并計算細胞存活率，探討大鼠心肌細胞與成纖維細胞的乳酸閾。并提取細胞蛋白，通過Western blot 方法行蛋白分析，觀察大鼠心肌細胞與成纖維細胞單羧酸轉(zhuǎn)運蛋白的表達情況。旨在為進一步研究心肌細胞與非心肌細胞之間的乳酸穿梭奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:體外培養(yǎng)原代大鼠心肌細胞和成纖維細胞，添加pH 值相同、濃度不同的乳酸(1mmol/L，2mmol/L，4mmol/L，8

2、mmol/L，16mmol/L，32mmol/L)孵育，建立乳酸孵育模型，通過測定OD 值觀察細胞的活力并計算細胞存活率。提取原代心肌細胞和成纖維細胞的蛋白，并用Western blot 方法進行蛋白分析，觀察MCT1及MCT4在這兩種細胞上的表達情況。
　　 結(jié)果:(1)原代心肌細胞在乳酸濃度為2mmol/L和4mmol/L 時，其OD 值最大，細胞存活率最高，與其他組之間比較有顯著差異，P＜0.05。這兩組之間無差異，P﹥0

3、.05。(2)原代成纖維細胞在乳酸濃度為4mmol/L和8mmol/L 時，其OD 值最大，細胞存活率最高，與其他組之間比較有顯著差異，P＜0.05。這兩組之間無差異，P﹥0.05。(3)兩種細胞MCT1的表達量均比MCT4的表達高，P＜0.05。而且心肌細胞的MCT1，MCT4表達量均比成纖維細胞高，P＜0.05。 討論：原代心肌細胞在乳酸濃度為2mmol/L和4mmol/L 時，細胞活力最高，細胞存活率最高，說明在此濃度時細胞吸收乳

4、酸最多，給細胞提供了相對充足的能量，故細胞存活率較其它組高。由此推斷心肌細胞的乳酸閾為2mmol/L-4mmol/L。然而隨濃度更進一步增高，細胞活力下降，可能是因為乳酸濃度過高，細胞由以攝取乳酸為主轉(zhuǎn)為以排出乳酸為主，故細胞能量供應(yīng)減少，細胞存活率下降。同樣成纖維細胞在濃度為4mmol/L和8mmol/L 時，細胞活力最高，細胞存活率最高。由此推斷成纖維細胞的乳酸閾為4mmol/L-8mmol/L。MCT1和MCT4在原代心肌細胞和成

5、纖維細胞均有表達，說明這兩種細胞均具備乳酸穿梭的轉(zhuǎn)運體，可以將乳酸轉(zhuǎn)入或轉(zhuǎn)出細胞。而且負責(zé)轉(zhuǎn)入的MCT1 高表達，負責(zé)轉(zhuǎn)出的MCT4 低表達表明兩種細胞均以乳酸轉(zhuǎn)入及氧化利用為主。MCT4的低表達可能是因為MCT4 需要某種刺激表達才會上調(diào)。同時心肌細胞上MCT1與MCT4的表達均比成纖維細胞上的高，提示心肌細胞乳酸代謝更活躍。
　　 結(jié)論:原代心肌細胞和成纖維細胞的乳酸閾的不同提示兩種細胞乳酸代謝方式不同，這是二者間可能存在乳